4.1. Серологически определяемые сублокусы (HLA-A, В, С, D) и активность В-лимфоцитов

Один из видов функциональной активности SD-сублокусов HLA Связан с индукцией иммунного ответа со стороны В-лимфоцитов, сражающегося в образовании антител, направленных к антигенным детерминантам HLA-A,В,С,DR. Этот вид активности SD-сублокусов имеет итогом образование активных иммунных сывороток анти-HLA и именно он послужил отправным моментом к открытию самой HLA-системы.

4.1.1. Иммуногенность сублокусов HLA-A, B/C

Изучая индуцирующую силу SD-сублокусов в антителообразовании, исследователи к середине 70-х годов обнаружили, что не все индивидуумы способны отвечать образованием антител в ответ на иммунизацию HLA-А,В,С-антигенами. В клиническую иммуногенетику было введено понятие "респондеры" и "нереспондеры".

Мы - Зарецкая Ю. М., Войлокова Р. Я., Долбин А. Г., Абрамов В. Ю. -провели подробное изучение феномена на "моделях" иммунизации беременностью, исследуя сыворотку женщин, перенесших несколько беременностей, и на "модели" иммунизации гемотрансфузиями, исследуя кровь пациентов-мужчин после множественных гемотрансфузий. При этом оказалось, что около 60% из тех и других не образуют антител против антигенных детерминант HLA-A,B,C (рис. 21).

Рис. 21. Иммунизация к HLA-А,В,С-сублокусам при беременности и в результате гемотрансфузий. Верхние цифры - число исследованных сывороток; нижние - число активных образцов. Штриховкой обозначена фракция активных сывороток; темные столбики - сравнительная иммуногенность сублокусов HLA (процент активных сывороток к каждому сублокусу)

Далее было проведено изучение сравнительной иммуногенности сублокусов HLA-A,B,C в тесте антителообразования. Образцы сывороток 1310 от женщин, перенесших 3 - 6 беременностей, проверялись на содержание антител к конкретному антигену сублокусов HLA-A,B,C. Данное число "иммунизаций", по нашим наблюдениям, является отпимальным для произведенного анализа по следующим причинам: после 3 - 4 беременностей образуются в основном моно- и диспецифические сыворотки с достаточно высоким коэффициентом корреляции; это число "иммунизаций" достаточно для проявления иммунизирующей способности антигенов HLA и для проведения дифференциального анализа по иммуногенности; при использовании в популяционном анализе сывороток "первобеременных" слабоиммуногенные специфичности могут себя не проявить.

Учитываемая в данном исследовании естественная рандом-иммунизация антигенами HLA-комплекса может быть измерена числом активных иммунных сывороток к определенному антигену, что в первом приближении выглядит так: "чем выше иммунизирующая сила антигена, тем больше активных иммунных сывороток соответствующей специфичности образуется при естественной рандомиммунизации". Однако при этом необходимо иметь в виду, что чем выше фенотипическая частота антигена в популяции, тем выше теоретически расчетная способность его к иммунизации [Зарецкая Ю. М. и др., 19791.

Однако теоретически расчетная фракция не совпадает с истинным числом сывороток к данному антигену, встречающихся в популяции, в силу ряда биологических закономерностей, одной из которых является описанный выше феномен неотвечаемости (нереспондеры). Вторая биологическая закономерность - различная иммуногенность самих антигенов HLA: в пределах теоретически расчетной фракции, одинаковой для двух антигенов с близкой частотой фенотипа, число иммунизированных индивидуумов будет различным в зависимости от меньшей или большей иммунизирующей силы самого антигена.

Скрининг сывороточных образцов был проведен на панели тест-клеток от 50 индивидуумов, включавших 36 - 41 антигенов HLA-А,В,С-сублокусов. Из этих образцов 680 были проверены на содержание антител к антигенам сублокуса HLA-C. Сыворотка считалась активной к определенному антигену и рассматривалась в анализе, если коэффициент корреляции составлял не менее 0,7 для моноспецифической и 0,6 для диспецифической сыворотки.

Из 1310 образцов была выделена 101 активная сыворотка с коэффициентами корреляции, удовлетворяющими вышеупомянутым условиям. На них 36 содержали антитела к сублокусу HLA-A, 60 к HLA-B и 5 к HLA-C, что составляет соответственно 2,7; 4,6 и 0,7% от общего количества исследованных образцов. Соотношение между фенотипической частотой антигена и числом иммунных реагентов соответствующей специфичности представлено в табл. 38. Для характеристики иммунизирующей активности HLA-антигенов в полуляции мы ввели определенный показатель "сывороточное число" (СЧ), характеризуемое числом активных сывороток к данному антигену на 1000 скринированных образцов. Из приведенной таблицы следует, что ряд антигенов как сублокуса А, так и В при достаточной фенотипической частоте являются слабоиммуногенными: из скринированных сывороток не было ни одного образца, содержащего антитела к антигенам HLA-A3, A19, A28, HLA-B16.

При частоте фенотипа до 10% основная группа сывороточных чисел располагается в интервале 0,7 - 4. Вместе с тем в этой фенотипически низкочастотной группе антиген HLA-B13 характеризуется высоким СЧ. По-видимому, его можно рассматривать как антиген с высокой иммуногенностью по антителообразованию. Для группы с частотой фенотипа 21 - 30% сывороточные числа в основном располагаются в интервале 1,5 - 6; в то же время антиген HLA-B7 дает более высокую степень иммуногенности, измеряемую СЧ-7,7; значит, его также следует отнести к антигенам с высокой иммуногенностью. Подавляющее большинство антигенов "высокочастотной группы", за исключением HLA-A2, обладают средним СЧ, следовательно, их можно рассматривать как антигенные детерминанты со сниженной иммуногенностью. Относительно антигенов сублокуса HLA-C пока с определенностью можно заключить, что из известных в настоящий момент Cw-антигенов наибольшее сывороточное число имеет антиген Cw4, имеющий также и наиболее высокую фенотипическую частоту.

Таблица 38

^*(По материалам Оксфордского Уоркшопа 1977 г.)

^**(Из 1310 скринированных.)

^***(Из 680 скринированных.)

Описанный выше анализ полностью не исчерпывает характеристики антигенов HLA по их иммуногенности в антителообразовании, однако он позволяет довольно точно выделить группу низкоиммуногенных детерминант и получить сведения о высокой иммуогенности некоторых других детерминант. На основании этого к низко иммуногенным следует отнести A3, А19 (Aw29, w30, w31, w32) A28 и В16, а к высокоиммуногенным - А2, В7, В13.

Поскольку суммарная частота генов сублокусов HLA-A и В составляет 1, то в предложенном анализе можно сравнивать иммуногенность сублокусов в целом. Сравнение показывает, что сыворотки, активные к сублокусу HLA-B, встречаются приблизительно в 2 раза чаще, чем к сублокусу HLA-A, что в определенной мере свидетельствует о большей индукции иммунных реакций антигенами сублокуса HLA-B.

Следует специально остановиться на клинико-практическом значении показателя "сывороточное число". Он позволяет заранее прогнозировать при просеве или любой рандом-иммунизации число активных сывороток, которые могут быть получены к определенному антигену. Можно предполагать, что при частых гемотрансфузиях рандомизированной крови у пациентов будут более часто возникать антитела специфичности А2, А10, В7, В13, поскольку эти антигены обладают высоким сывороточным числом.

4.1.2. Локус HLA-DR в антителообразовании

Мы провели исследование, имевшее целью выяснить способность DR-детерминант индуцировать антителообразование. Объектом исследования служили сыворотки беременных женщин, сыворотки пациентов, иммунизированных гемотрансфузиями, и сыворотки реципиентов аллогенной почки, до операции не содержащих HLA- антител. Все три иммунизирующие "субстанции" достаточно богаты HLA-DR-антигенами (см. 1.3). Сыворотки предварительно были адсорбированы смесью тромбоцитов от 100 - 120 индивидуумов для элиминации антител, выявляемых на Т-лимфоцитах. В определении были использованы обогащенные В-клеточные суспензии, содержание В-лимфоцитов в которых составляло не менее 80%. Сыворотка рассматривалась как содержащая В-антитела, если она реагировала не менее чем с 10% клеточных образцов в панели от 20 неродственных индивидуумов, при этом инкубация клеток с сывороткой происходила при 37°С (табл. 39).

Таблица 39

Данные таблицы свидетельствуют о том, что при различных видах иммунизации HLA-DR-антитела образуются у 20 - 60% индивидуумов, т. е. несколько чаще, чем HLA-А,В,С-антитела, но и здесь есть неотвечающие индивидуумы. Следовательно,

для некоторых типов иммунных систем данные антигенные детерминанты оказываются недостаточно сильным инициирующим фактором при индукции антител.

В клиническом плане значительный интерес представляет DR-иммунизация, происходящая за счет аллогенного почечного трансплантата. Нам не удалось отметить возрастания фракции В-иммунизированных реципиентов с увеличением сроков удержания трансплантатов, однако у лиц, обследованных через 2 - 6 лет после трансплантации, в большинстве случаев В-активные антитела встречались без примеси Т-антител.

Ряд авторов отмечают, что в период кризов отторжения трансплантата увеличивается интенсивность иммунизации за счет детерминант В-лимфоцитов [Silbermann Н. et al., 1978; Lepage V. et al., 1978; Suthantherian M. et al., 1978; Ting A., Morris P., 19791, что увеличивает "носительство" соответствующих антител до 70 - 90%, а также влечет да собой возрастание их титра [Opeltz G. et al., 1979].