4.2. HLA-D (МLС)-локус и активность Т-лимфоцита

В общем виде способность HLA-D-детерминант индуцировать иммунный ответ в виде бластообразования сейчас уже не требует специальных доказательств, так как само существование D-локуса и его картирование в HLA-регионе основывалось на этом свойстве антигенов, входящих в HLA-D-(MLC)-локyc (см. 1.4.3).

Детализация феномена индукции MLC-реактивности HLA-D- детерминантами привела к открытию возможности рестимуляции клеток HLA-D (или не HLA-D) антигенными структурами и введению в клиническую иммуногенетику нового теста PLT (Primed Lymphocyte Typing).

4.2.1. Индуцирующая роль HLA-D локус в MLC-реакции

Для понимания механизмов этого типа иммунного ответа, особенностей его индуцирования, а следовательно, и детерминант, инициирующих MLC-активность, необходимо было установить тип клеток, участвующих в MLC, расшифровать субпопуляции лимфоцитов, скрывающиеся за общими символами отвечающая - R - и стимулирующая - S (см. рис. 10).

В отношении отвечающих клеток распознающих "чужие" антигенные детерминанты, вопрос был решен однозначно к середине 70-х годов [Opeltz G. et al., 1975; Han E. et al., 1976]: клетками, ответственными за феномен "распознавания" аллогенных детерминант гистосовместимости, т. е. R-клетками, являются Т-лимфоциты. Это положение было подтверждено более поздними исследованиями [Hokland P., Heron J., 1979]; авторский коллектив обратил внимание на роль макрофагов (А-клеток) в регуляции интенсивности реакции R-клеток в MLC.

Логика развития учения о большой системе гистосовместимости человека подводила к мысли о том, что S-клетками в MLC-реакции являются В-лимфоциты, поскольку стало известно, что DR-детерминанты, а следовательно, и D-детерминанты экспрессированы на В-лимфоцитах (см. 1.3 и 1.4). Однако четкие доказательства этого положения были получены после 1975 г. при обработке обеих участвующих в MLC клеточных популяций иммунной сывороткой, направленной к гликопротеидам мембраны В-лимфоцитов [Gordon J., Rode М., 1975; Thorsby Е. et al., 1975; Geier A., Cresswell W., 1977]. Обработка такой сывороткой стимулирующей популяции приводила к ингибиции MLC-реакции, в то время как обработка отвечающей популяции не влияла на развитие MLC-реакции у человека. Итог этих исследований можно резюмировать следующим образом: HLA-D-детерминанты, экспрессированные на В-лимфоцитах, инициируют иммунный ответ, реализующий в бластообразующей реакции Т-лимфоцитов.

Способны ли другие субъединицы HLA-комплекса к индукции активности Т-лимфоцитов в MLC?

Наиболее точный способ проверки этого положения - постановка реципрокной MLC между несколькими образцами гомозиготных клеток, открывающих одну и ту же HLA-D-специфичность. Такой эксперимент был произведен J. Keuning (1978), причем было показано, что в данной ситуации MLC-реакция не всегда отрицательна. Причиной позитивности могут быть добавочные индуцируюшие влияния, исходящие как от субъединиц внутри HLA-комплекса, так и вне его. Одна из возможностей- влияние минорного локуса MLC, расположенного близ HLA-A-региона. Другая возможность, исходящая из HLA-комплекса, - частичное влияние SD-локусов на активацию Т-лимфоцитов в MLC-реакции. Эта возможность вытекала из наблюдений голландских исследователей [Bijnen A. et al., 1977; Termijtelen A. et al., 1977], показавших слабую MLC-стимуляцию в кроссоверных семьях между сибсами, по HLA-D-идентичными, но различными по HLA-A,B или С, или сильную MLC-стимуляцию между HLA-D-идентичными, а по HLA- А,В,С-неидентичными неродственниками. Позднее те же исследователи [Jonker М., van Rood J., 1978] показали, что антитела, сорбированные на тромбоцитах, а затем элюированные (т. е. HLA-A,B, А,В,С-антитела), способны ингибировать MLC-реакцию, а именно ее стимулирующий компонент.

D. Albrechtsen et al. (1978, 1979) доказали участие DR-детерминант в индукции активности Т-лимфоцитов при реакции бластообразования. Авторы выявили на клетках 8 первых DR-детерминант; принимая уровень MLC между клетками несовместимыми по двум DR-детерминантам за 100 %, они определили уровень MLC в случае несовместимости по одному DR-антигену в 55%, а при DR-совместимости - в 17%.

Участие структур, не входящих i HLA-комплекс, в индуцировании MLC-активности у человека ставится под сомнение [Кеuning J., 1978].

4.2.2. Индукция HLA-D-детерминантами клеток памяти в MLC. PLT-тест

Активность HLA-D детерминант в формировании иммунного ответа выразилась в их способности индуцировать MLC-активность по вторичному типу, что означает способность к образованию MLC- реактивных клеток памяти. Феномен был обнаружен в 1973 г. в мышиной системе [Andersson L., Науrу Р., 1974; Gorczynski R., Rittenberg М., 1975] и затем открыт у человека [Fradelizi D., Dausset J., 1975]. Феномен заключается в том, что лимфоциты, стимулированные в первичной MLC (примированные), будучи рестимулированными исходными стимулирующими клетками, развивают MLC-ответ по вторичному типу. Это выражается в бурной пролиферации с усиленным включением радиоактивной метки (по сравнению с первичной MLC) и вдвое ускоренным достижением пика реакции (через 72 ч по сравнению со 120 - 144 ч).

Л. П. Алексеев (1978) исследовал ответ лимфоцитов, примированных in vivo (в организме реципиента с трансплантатом аллогенной почки), на повторную стимуляцию клетками примирующего генотипа. Он установил, что через 2 нед после трансплантации в крови реципиента можно обнаружить клетки, реагирующие в MLC по ускоренному типу (табл. 40).

Ускоренная MLC отмечена только по отношению к клеткам донора (который был "использован" для первичной стимуляции in vivo), что выражалось в достижении "пика" реакции через 72 ч, в то время как по отношению к клеткам 3-го партнера реакция протекала по первичному типу с достижением "пика" через 144 ч.

Ряд исследователей отводят место в этом феномене также SD- локусам, считая инициирующий фактор комплексом HLA-SD и LD-детерминантом [Dennert Е., 1976; Sollinger A., Bach F., 1976]. Хотя HLA-D-детерминанты играют ведущую роль в феномене, существуют, по-видимому, другие локусы в HLA или вне ее, способные влиять на формирование MLC-2 [Zier В. et al., 1978; Singal D., 1979; Singal D., 1979].

Таблица 40

Способность лимфоцитов к MLC-2 была с успехом использована для идентификации HLA-D-антигенов [Bach J. et al., 1975; Mawas С. et al., 1975; Bradley B. et al., 1976]. Метод типировании на основе вторичной MLC получил название PLT. В PLT клетки стимулируются HTC известной специфичности, а затем рестимулируются неизвестными лимфоцитами, которые еще необходимо идентифицировать. Развитие реакции по типу MLC-2 свидетельствует о том, что неизвестные клетки являются носителями LD-детерминанты, определяющей специфичность HTC.

В отличие от типирования с помощью HTC данный метод имеет .следующие преимущества:

- в случае идентичности клеток-респондеров и стимуляторов учет реакции проводится по положительному включению ³Н-тимидина, что значительно уменьшает возможность ошибки, так как "MLC+" легче учитываема, чем "MLC" - (как и в HTC-методе);

- ответ об идентичности клеток можно получить через 72 ч вместо 144 ч, как это имеет место MLC на базе HTC.

Сравнение методов типирования HLA-D антигенов с помощью HTC и PLT показывает, что могут быть определенные расхождения в результатах. A. Termijtelen et al. (1977) провели типирование 20 клеточных образцов HTC-методом и не определили ни одной известной специфичности: будучи типированы в PLT, 12 из этих образцов выявили известные антигены (Dw4, Dw5 и Dw6). Данный феномен получил название TYN-PLOP (typing cell negative, PLT of couse positive).

Авторы пытаются объяснить расхождение в результатах влиянием не HLA-D локусов, которое при PLT-методе не имеет существенного значения.

Другая группа фактов получена J. Thomsen et al. (1976), обнаруживших индивида, владевшего 4 HLA-D-детерминантами согласно HTC-методу и только двумя по PLT-типированию.

Подобные результаты могут быть связаны как с методическими трудностями, встречающимися при использовании HTC и PLT-методов, так и с нераспознанной еще генетикой субъединиц, ответственных за феномены бластообразования лимфоцитов.

Две группы фактов, полученных недавно, свидетельствуют о том, что последнее предположение не лишено оснований.

R. Wank et al. (1979) использовали для постановки первичной и вторичной MLC клетки сиблингов-рекомбинантов и обнаружили существование не HLA-D-структуры (детерминанты), которая контролировалась геном, расположенным дистально от HLA-B, не связанной с HLA-D и DR и вызывающей активную PLT-реакцию. A. Termijtelen et al. (1980) выделили детерминанту, ответственную за PLT (PL3A), которая отличалась от HLA-D- и DR-детерминант и была ассоциирована с HLA-A1, B8, Dw3 и DR3.

Таким образом, пока есть основания полагать, что если постулируемый локус PLT существует, он должен быть картирован внутри HLA-комплекса.