Обсуждение

Протяженность делеций можно определить несколькими способами. Первый из них заключается в том, что попарно скрещивают между собой фаги с различными делециями. Второй состоит в их картировании с помощью гетеродуплексного анализа. Третий заключается в том, чтобы испытать каждую делецию на способность рекомбинировать с точковыми мутациями и на основании этих данных построить карту делений. Если есть время, то можно попробовать все эти методы. Как проводить картирование, подробно описано в методике 10. Поскольку нас интересует ген β-лактамазы, то для выявления тех актов рекомбинации, которые привели к появлению устойчивости к ампициллину, можно использовать чашки Red (методика 7) или лизогенизацию с последующей проверкой на устойчивость к этому антибиотику.

Тест с использованием лизогенизации обладает наибольшей чувствительностью, и его можно провести следующим образом. Приготавливается λ-чашка с газоном BNN45, и на этот газон наносятся попарно друг на друга капли делеционных и (или) точковых мутантов Amp^S. Чашку инкубируют в течение ночи при 34°С. Клетки из центра каждого пятна переносят с помощью зубочисток на чашку LB + ампициллин и на чашку LB (служит контролем), чтобы проверить, образуются ли вообще лизогенные бактерии, устойчивые к ампициллину (Amp^R). Такие лизогенные бактерии будут образовываться лишь в том случае, если испытуемые фаги Amp^S могут рекомбинировать между собой.