НОВОСТИ    БИБЛИОТЕКА    СЛОВАРЬ-СПРАВОЧНИК    КАРТА САЙТА    ССЫЛКИ    О САЙТЕ

предыдущая главасодержаниеследующая глава

I. Ступенчатые градиенты CsCl для ротора Beckman 50.1

А. Для очистки от белков фаг лучше всего осадить в растворе CsCl из верхней части пробирки.

  1. На дно нитроцеллюлозной пробирки размером 1/2×2 дюйма* от центрифуги Beckman налейте 1 мл раствора 5,0 М CsCl, 10 мМ MgSO4, 10 мМ трис (рН 8) и 0,1 мМ Na2-ЭДТА (ρ=1,6).
  2. Наслоите 3 мл раствора 3,0 М CsCl, 10 мМ MgSO4, 10 мМ трис (рН 8) и 0,1 мМ Na2-ЭДТА (ρ=1,4).
  3. Наслоите 1 мл суспензии фага в буфере для разведения фага λ (10 мМ MgSO4 и 10 мМ трис, рН 7,5). Если фаг уже находится в растворе CsCl (ρ=l,5), то сначала разведите 0,5 мл такой суспензии фага 0,5 мл буфера для разведения фага λ.
  4. Центрифугируйте в роторе SW50.1 при 30000 об/мин в течение 1 ч при 20°С.
  5. Шприцем на 1 мл с иглой 5/8 дюйма номер 25 проколите пробирку сбоку и отберите фаг. Отбирайте не более 0,5 мл.

* (1 дюйм равен примерно 2,5 см. - Прим. ред.)

Б. Для очистки от ДНК и РНК лучше всего сделать так, чтобы фаг всплыл со дна пробирки в растворе CsCl.

  1. На дно нитроцеллюлозной центрифужной пробирки налейте 0,5 мл фага, суспендированного в растворе CsCl с плотностью, соответствующей плавучей плотности фага (т. е. с ρ≅1,5).
  2. Добавьте равный объем (0,5 мл) насыщенного (при 25°С) раствора CsCl (7,2 М) в 10 мМ MgSO4, 10 мМ трис (рН 8) и 0,1 мМ Na2-ЭДТА (ρ=1,92). Хорошо перемешайте.
  3. Наслоите 3 мл раствора 5,0 М CsCl в 10 мМ MgSO4, 10 мМ трис (рН 8) и 0,1 мМ Na2-ЭДТА (ρ=1,6).
  4. Наслоите 1 мл раствора 3,0 М CsCl в 10 мМ MgSO4, 10 мМ трис (рН 8) и 0,1 мМ Na2-ЭДТА (ρ=1,4).
  5. Центрифугируйте в роторе SW50.1 при 30000 об/мин в течение 1 ч при 20°С.
  6. Шприцом на 1 мл с иглой 5/8 дюйма номер 25 проколите пробирку сбоку и отберите фаг. Отбирайте не более 0,5 мл.
предыдущая главасодержаниеследующая глава






Ученые добавили две новые буквы в генетический код

В наших генах есть два «неандертальских процента»

Сколько у вас хромосом? История одной мутации

Инвестиции в редактирование генома

Распространение артритов объяснили исходом человека из Африки

Обнаружены гены, отвечающие за чувствительность к магнитному полю Земли

Вредные мутации в геноме усиливают влияние друг друга

Найдены 6 500 генов, отличающие мужчин от женщин

Антропологи извлекли ДНК древних людей из пещер без костных останков

Расшифровка генома ячменя принесла больше вопросов, чем ответов

Сибирские генетики сделали первые шаги к управлению фотосинтезом

Александр Баев – один из пионеров исследований генома человека

215 петабайт в одном грамме ДНК




© Злыгостев Алексей Сергеевич, подборка материалов, оцифровка, статьи, оформление, разработка ПО 2013-2018
При копировании материалов проекта обязательно ставить активную ссылку на страницу источник:
http://genetiku.ru/ 'Genetiku.ru: Генетика'

Рейтинг@Mail.ru