I. Ступенчатые градиенты CsCl для ротора Beckman 50.1

А. Для очистки от белков фаг лучше всего осадить в растворе CsCl из верхней части пробирки.

1. На дно нитроцеллюлозной пробирки размером ¹/₂×2 дюйма^* от центрифуги Beckman налейте 1 мл раствора 5,0 М CsCl, 10 мМ MgSO₄, 10 мМ трис (рН 8) и 0,1 мМ Na₂-ЭДТА (ρ=1,6).
2. Наслоите 3 мл раствора 3,0 М CsCl, 10 мМ MgSO₄, 10 мМ трис (рН 8) и 0,1 мМ Na₂-ЭДТА (ρ=1,4).
3. Наслоите 1 мл суспензии фага в буфере для разведения фага λ (10 мМ MgSO₄ и 10 мМ трис, рН 7,5). Если фаг уже находится в растворе CsCl (ρ=l,5), то сначала разведите 0,5 мл такой суспензии фага 0,5 мл буфера для разведения фага λ.
4. Центрифугируйте в роторе SW50.1 при 30000 об/мин в течение 1 ч при 20°С.
5. Шприцем на 1 мл с иглой 5/8 дюйма номер 25 проколите пробирку сбоку и отберите фаг. Отбирайте не более 0,5 мл.

^* (1 дюйм равен примерно 2,5 см. - Прим. ред.)

Б. Для очистки от ДНК и РНК лучше всего сделать так, чтобы фаг всплыл со дна пробирки в растворе CsCl.

1. На дно нитроцеллюлозной центрифужной пробирки налейте 0,5 мл фага, суспендированного в растворе CsCl с плотностью, соответствующей плавучей плотности фага (т. е. с ρ≅1,5).
2. Добавьте равный объем (0,5 мл) насыщенного (при 25°С) раствора CsCl (7,2 М) в 10 мМ MgSO₄, 10 мМ трис (рН 8) и 0,1 мМ Na₂-ЭДТА (ρ=1,92). Хорошо перемешайте.
3. Наслоите 3 мл раствора 5,0 М CsCl в 10 мМ MgSO₄, 10 мМ трис (рН 8) и 0,1 мМ Na₂-ЭДТА (ρ=1,6).
4. Наслоите 1 мл раствора 3,0 М CsCl в 10 мМ MgSO₄, 10 мМ трис (рН 8) и 0,1 мМ Na₂-ЭДТА (ρ=1,4).
5. Центрифугируйте в роторе SW50.1 при 30000 об/мин в течение 1 ч при 20°С.
6. Шприцом на 1 мл с иглой 5/8 дюйма номер 25 проколите пробирку сбоку и отберите фаг. Отбирайте не более 0,5 мл.