Новости     Библиотека     Словарь-справочник     Ссылки     О сайте













предыдущая главасодержаниеследующая глава

I. Ступенчатые градиенты CsCl для ротора Beckman 50.1

А. Для очистки от белков фаг лучше всего осадить в растворе CsCl из верхней части пробирки.

  1. На дно нитроцеллюлозной пробирки размером 1/2×2 дюйма* от центрифуги Beckman налейте 1 мл раствора 5,0 М CsCl, 10 мМ MgSO4, 10 мМ трис (рН 8) и 0,1 мМ Na2-ЭДТА (ρ=1,6).
  2. Наслоите 3 мл раствора 3,0 М CsCl, 10 мМ MgSO4, 10 мМ трис (рН 8) и 0,1 мМ Na2-ЭДТА (ρ=1,4).
  3. Наслоите 1 мл суспензии фага в буфере для разведения фага λ (10 мМ MgSO4 и 10 мМ трис, рН 7,5). Если фаг уже находится в растворе CsCl (ρ=l,5), то сначала разведите 0,5 мл такой суспензии фага 0,5 мл буфера для разведения фага λ.
  4. Центрифугируйте в роторе SW50.1 при 30000 об/мин в течение 1 ч при 20°С.
  5. Шприцем на 1 мл с иглой 5/8 дюйма номер 25 проколите пробирку сбоку и отберите фаг. Отбирайте не более 0,5 мл.

* (1 дюйм равен примерно 2,5 см. - Прим. ред.)

Б. Для очистки от ДНК и РНК лучше всего сделать так, чтобы фаг всплыл со дна пробирки в растворе CsCl.

  1. На дно нитроцеллюлозной центрифужной пробирки налейте 0,5 мл фага, суспендированного в растворе CsCl с плотностью, соответствующей плавучей плотности фага (т. е. с ρ≅1,5).
  2. Добавьте равный объем (0,5 мл) насыщенного (при 25°С) раствора CsCl (7,2 М) в 10 мМ MgSO4, 10 мМ трис (рН 8) и 0,1 мМ Na2-ЭДТА (ρ=1,92). Хорошо перемешайте.
  3. Наслоите 3 мл раствора 5,0 М CsCl в 10 мМ MgSO4, 10 мМ трис (рН 8) и 0,1 мМ Na2-ЭДТА (ρ=1,6).
  4. Наслоите 1 мл раствора 3,0 М CsCl в 10 мМ MgSO4, 10 мМ трис (рН 8) и 0,1 мМ Na2-ЭДТА (ρ=1,4).
  5. Центрифугируйте в роторе SW50.1 при 30000 об/мин в течение 1 ч при 20°С.
  6. Шприцом на 1 мл с иглой 5/8 дюйма номер 25 проколите пробирку сбоку и отберите фаг. Отбирайте не более 0,5 мл.
предыдущая главасодержаниеследующая глава




© Злыгостев Алексей Сергеевич, подборка материалов, оцифровка, статьи, оформление, разработка ПО 2013-2017
При копировании материалов проекта обязательно ставить активную ссылку на страницу источник:
http://genetiku.ru/ "Genetiku.ru: Генетика"