I. Реакция

1. H₂O; объем = 20 мкл - (объем раствора ДНК, добавленного в пробирку от микрофуги).
2. 2,5 мкл буфера NT для ник-трансляции 10×: 0,5 М трис (рН 7,5); 0,1 MMgSO₄; 10 мМ ДТТ; 500 мкг/мл БСА.
3. 2,5 мкл раствора, содержащего по 0,2 мМ всех dNTP, кроме того, который мечен ³²Р.
4. 0,5 мкг ДНК (или менее).
5. 0,5 мкл разведенной ДНКазы (см. разд. III в данной методике).
6. Перенесите эту реакционную смесь в пробирку от микрофуги, в которой находится dNTP, меченный ³²Р (см. разд. II данной методики).
7. 0,1 мкл раствора очищенной до гомогенности ДНК-полимеразы I E. coli с концентрацией 2 мг/мл.
8. Инкубируйте около 3 ч при 14°С. Обычно реакция протекает следующим образом. В начальный период включения метки не происходит, затем следует быстрое линейное увеличение включения, замедление включения, плато, а затем, снижение количества включенной метки, причем иногда оно происходит быстро. Прекращайте реакцию на стадии замедленного роста включения или на стадии плато. В ДНК должно включиться по крайней мере 25% метки.
9. Остановите реакцию. Добавьте 25 мкл раствора: 0,02 М Na₃-ЭДТА. 2 мг/мл ДНК-носителя (обработанной ультразвуком тимусной ДНК); 0,2% ДСН.