Приложение 7. Расщепление рестриктирующими эндонуклеазами

I. Методика

1. В полипропиленовую пробирку от микрофуги внесите 18мкл H₂O (минус объем раствора ДНК).
2. Добавьте 2 мкл буфера для рестрикции 10× (с высокой, средней или низкой концентрацией соли; для подбора буфера см. разд. II).
3. Добавьте необходимое количество ДНК в 10 мМ трис (рН 7,4) и 1 мМ Na₂-ЭДТА.
4. Добавьте рестриктазу. Обычно 1 ед. фермента расщепляется 1 мкг ДНК за 15 мин. Хорошо перемешайте.
5. Инкубируйте в течение 30 мин при той температуре, которая указана в разд. II (см. ниже) (обычно при 37°С).
6. Прогрейте в течение 5 мин при 70°С, чтобы инактивировать рестриктазу и ферментные примеси, а также чтобы расплавить липкие концы у ДНК фага λ.