Новости     Библиотека     Словарь-справочник     Ссылки     О сайте













предыдущая главасодержаниеследующая глава

Приложение 7. Расщепление рестриктирующими эндонуклеазами

I. Методика

  1. В полипропиленовую пробирку от микрофуги внесите 18мкл H2O (минус объем раствора ДНК).
  2. Добавьте 2 мкл буфера для рестрикции 10× (с высокой, средней или низкой концентрацией соли; для подбора буфера см. разд. II).
  3. Добавьте необходимое количество ДНК в 10 мМ трис (рН 7,4) и 1 мМ Na2-ЭДТА.
  4. Добавьте рестриктазу. Обычно 1 ед. фермента расщепляется 1 мкг ДНК за 15 мин. Хорошо перемешайте.
  5. Инкубируйте в течение 30 мин при той температуре, которая указана в разд. II (см. ниже) (обычно при 37°С).
  6. Прогрейте в течение 5 мин при 70°С, чтобы инактивировать рестриктазу и ферментные примеси, а также чтобы расплавить липкие концы у ДНК фага λ.
предыдущая главасодержаниеследующая глава




© Злыгостев Алексей Сергеевич, подборка материалов, оцифровка, статьи, оформление, разработка ПО 2013-2017
При копировании материалов проекта обязательно ставить активную ссылку на страницу источник:
http://genetiku.ru/ "Genetiku.ru: Генетика"