7.4. Мониторинг количественного состава Т- и В-клеточных популяций
Мониторинг количественного состава клеточных популяций основан главным образом на технике розеткообразования разных типов. Являясь "классическими" методами экспериментальной и клинической иммунологии, виды розеткообразования описаны достаточно полно [Чередеев А. Н., 1981], поэтому нам нет в этом необходимости. Реакция спонтанного розеткообразования (Е-розетки) количественно характеризует Т-клеточную популяцию, а "комплементарное" розеткообразование (ЕАС-розетки) - В-клеточную.
По-видимому, J. F. Bach (1973) был первым, кто произвел оценку количественного состава Т-клеточной популяции у пациентов аллогенной почки, используя технику розеткообразования. Начиная с 1974 г. в НИИТиИО МЗ СССР осуществляется динамическое наблюдение за количественным составом T- и В-клеточных популяций у реципиентов аллогенного органа на основе тестов розеткообразования [Войлокова Р. Я., 1975; Войлокова Р. Я. и др., 1976]; при этом мониторинг В-популяции произведен нами впервые.
Было обследовано 134 больных, из них 89 находились на программном гемодиализе и 45 - в раннем посттрансплантационном периоде. Обследование проводили 3 раза в неделю в течение 3 нед; в качестве контроля исследовали T- и В-розеткообразующие клетки у 21 здорового добровольца.
Т- и В-лимфоциты определяли по методу С. Mendes (1973). За Т-розетку принимали лимфоцит, окруженный тремя эритроцитами барана или более. Меньшее число эритроцитов в расчет не принимали, так как оно отражает случайное распределение [Чередеев А. Н., 1981]. В розеткообразующие клетки подсчитывали в смеси, состоящей из лимфоцитов больного, из человеческих аллогенных эритроцитов, сенсибилизированных кроличьими антителами (в субагглютинирующем титре) к эритроцитам человека и комплементом мыши. Перед каждым определением В-розеткообразующих клеток ставили реакцию агглютинации эритроцитов человека (в кроличьей антисыворотке) к эритроцитам человека для определения субагглютинирующего титра, который колебался от 1/16 до 1/512. За В-розеткообразующие клетки принимали лимфоцит, окруженный не менее чем тремя эритроцитами человека.
У здоровых людей количество Т-лимфоцитов в периферической крови составляло в среднем 48,1 + 1,8% (табл. 69); у больных с ХПН количество Т-розеткообразующих клеток было в тех же пределах.
Таблица 69
Число В-розеткообразующих клеток на 100 лимфоцитов у здоровых и больных с аллотрансплантированной почкой
Обследованные лица
Число обследованных
Число Т-розеткообразующих клеток
минимум
максимум
среднее
Здоровые добровольцы
21
38
69
48,1 ± 1,8
Больные:
на гемодиализе до операции
89
25
64
45,3 ± 0,8
с благоприятным течением послеоперационного периода
11
18
27
23,3 ± 0,9
с кризом отторжения
21
30
54
40,9 ± 1,5
с уплотнением трансплантата
13
30
51
39,4 ± 1,8
с инфекционными осложнениями
13
19
29
24,2 ± 0,9
После аллотрансплантации почки и назначения иммунодепрессивной терапии количество Т-розеткообразующих клеток понижалось в среднем на 50% от дооперационного уровня. В дальнейшем при благоприятном течении послеоперационного периода и адекватности иммунодепрессивной терапии количество Т-розеткообразующих клеток оставалось пониженным.
В 13 случаях с уплотнением трансплантата (один из ранних признаков проявления криза отторжения) и в 21 случае с клинически выраженным кризом наблюдалось увеличение количества Т-розеткообразующих клеток, которое достигло уровня, близкого к дооперационному (см. табл. 69). При купировании криза отторжения усилением иммунодепрессивной терапии количество Т-лимфоцитов значительно снижалось (см. табл. 69).
Установлено, что из 26 больных, имевших острый криз отторжения через 3 нед после операции, увеличение количества Т-розеткообразующих клеток опережало криз или совпадало с ним у 21 больного, "опаздывало" (повышалось на высоте криза) у троих, а у двух больных количество T-лимфоцитов оставалось сниженным. Таким образом, подъем количества Т-розеткообразующих клеток к 80,8% больных совпадал с острым кризом отторжения или опережал его.
Таблица 70
Число В-розеткообразующих клеток на 100 лимфоцитов у здоровых и больных с аллотрансплантированной почкой
Обследованные
Число обследованных
Число В-розеткообразующих клеток
минимальное
максимальное
Среднее
Здоровые добровольцы
17
10
28
17,1 ± 1,3
Больные:
на гемодиализе до операции
42
10
25
16,4 ± 0,5
с кризом отторжения
8
26
37
32,3 ± 1,5
с уплотнением трансплантата
15
21
42
30,3 ± 1,7
с инфекционными осложнениями
15
17
46
31,3 ± 2,3
Результаты изучения количества В-лимфоцитов представлены в табл. 70. У здоровых добровольцев количество В-розеткообразующих клеток в среднем составляло 17,1 ± 1,3%, у больных с ХПН - 16,4 ± 0,5%.
При появлении признаков уплотнения трансплантата, развернутых клинических проявлений острого криза отторжения или воспалительных процессов инфекционного характера количество В-розеткообразующих клеток статистически достоверно возрастало.
У двух больных при сочетании хорошей функции трансплантата и инфекционного осложнения наблюдалось уменьшение количества Т-розеткообразующих и повышение количества В-розеткообразующих клеток.
Нам пока не ясны механизмы активации В-лимфоидной популяции в периоды кризов отторжения. Как рабочие гипотезы можно выдвинуть два предположения:
- активация служит отражением опосредованной через антитела "заинтересованности" В-клеток в иммунных реакциях, разрешающихся кризом отторжения;
- активация является следствием видоизменения сложных взаимоотношений между Т- и В-супрессорными популяциями, приводящего к их количественной перестройке [см. Р. В. Петров (ред.), 1978].
Для целей иммунологического мониторинга важно, что имеется значимая взаимосвязь между перераспределением в количественном составе Т- и В-клеточных популяций и ухудшением функции трансплантированного органа. Повышение числа Т-лимфоцитов на фоне определенной иммунодепрессивной нагрузки должно восприниматься как сигнал к соответствующим терапевтическим мерам. При инфекционных осложнениях, как показали наши исследования и данные советских и зарубежных коллег [Дзержинская И. И., Махлин Н. В., 1977; Testsuju Т., 1977], число Т-розеткообразующих клеток существенным образом не меняется. Следовательно, одновременный мониторинг количественного состава основных типов лимфоцитов методами розеткообразования позволяет дифференцировать изменения, связанные с кризом отторжения, от изменений, вызываемых инфекцией.
Данный вид иммунологического мониторинга был первым, который стали использовать зарубежные трансплантационные центры. S. Birkeland (1978, 1979) проводил еженедельное определение количественного состава Т- и В-клеточных популяций у пациентов после пересадки аллогенной почки. Так же как мы, автор отметил большую чувствительность T-лимфоцитов к массивным дозам иммунодепрессии, используемым сразу после трансплантации; им же была показана прямая зависимость между увеличением числа T-лимфоцитов и кризами отторжения.
Обследуя реципиентов с почечным и сердечным трансплантатом, Е. Thomas и сотр. (1978) обнаружили четкую корреляцию между развитием кризов отторжения в раннем посттрансплантационном периоде и увеличением популяции T-лимфоцитов. В то же время авторы отметили, что при резком падении В-розеткообразующих клеток увеличивается частота инфекционных осложнений.
В последнее время появились сообщения, предлагающие оценивать не только количественный состав T-клеточной популяции в целом, но и отдельные его субпопуляции. Так, введено понятие об "активных" T-розеткообразующих клетках, которые образуют розетки с эритроцитами барана практически без инкубации. Ясного представления о назначении этого вида клеток пока не имеется, однако показано, что у реципиентов аллогенной почки в прекризовый период существенно возрастает содержание тотальных и "активных" T-розеток, при этом возрастание Т-"активных" розеток было более заметным [Orlic A. et al., 1979].
Все авторы, использовавшие мониторинг количественного состава популяций лимфоцитов, отмечают его ценность для выбора тактики иммунодепрессивной терапии [Войлокова Р. Я. и др., 1980; Thomas F. et al., 1978; Miller J. et al., 1979; Korcakowa L." Kocandrle V., 1980].