5.7. Высшие уровни упаковки ядерных РНП-частиц и их взаимодействие с ядерным скелетом

В электронном микроскопе на срезах ядерные гяРНП обычно выглядят как крупные глобулярные или неравномерные фибриллярные образования. Лишь в некоторых случаях в них удается сразу выявить исходную РНП-фибриллу с 30S-частицами, сидящими на цепи РНК. Очевидно, что подобно тому как 100 Å-фибрилла нуклеосом укладывается в структуры высшего порядка, так и первичная РНП-фибрилла подвергается дальнейшему складыванию и упаковке. Это тем более просто, что РНК в отличие от ДНК весьма гибкая молекула и никаких запретов для ее изгибания под любым углом нет. Какие законы управляют вторичным складыванием фибриллы РНП - не известно. Не исключено, что вторичное складывание играет важную роль в процессах сплайсинга, например сближая между собою границы интрона.

Ядерные РНП-частицы образуют контакты с ядерным матриксом. Еще в наших ранних опытах с Ю. С. Ченцовым было показано, что нуклеонемы ядерного скелета содержат РНК. Далее Ш. Пенман (США) показал, что при выделении ядерного матрикса большая часть гяРНК остается в связанном с ним состоянии, если при выделении полностью исключить РНКазную деградацию РНК.

Наш метод выделения гяРНК из ядер печени крысы, включающий длительные экстракции разбавленными солевыми растворами при рН 7,8-8,0, базируется на слабом РНКазном гидролизе исходных комплексов, что ведет к их отщеплению от ядерного скелета. Очень слабая РНКазная деградация идет, очевидно, даже в присутствии ингибитора РНКазы. Именно поэтому наш метод оказался не эффективным при работе с ядрами, лишенными заметной РНКазной активности (например, клетки Не La). Тогда, однако, удавалось извлечь 30S-частицы, если экстрагировать ядра не при 0°, а при 30°.

Чтобы избежать этих сложностей, многие авторы использовали вместо экстракции раствором НМТ, рН 8, механическое разрушение клеточных ядер с помощью ультразвука. При этом происходит эффективная солюбилизация гяРНК, но полученные частицы крайне гетерогенны по своему белковому составу - они практически не отличаются от препаратов ядерного матрикса, хотя и в их составе можно видеть информатин.

(Таким образом, ультразвуковое облучение разрушает ядерный матрикс и освобождает гяРНП вместе с прикрепленными к ним фрагментами ядерного скелета. Поэтому такие препараты вряд ли адекватны для изучения структуры гяРНП, но они могут быть использованы для выяснения природы взаимодействия гяРНП с ядерным скелетом. К сожалению, к настоящему моменту никаких данных о природе этих взаимодействий нет. Между тем вопрос этот очень важный, ибо такие взаимодействия могут играть важнейшую роль в процессах ядерно-цитоплазматического транспорта мРНК.