Введение

Транспонируемые элементы могут встраиваться во многие точки бактериальной хромосомы. Если сайт включения оказывается в пределах какого-либо гена бактерии, то линейная непрерывность этого гена нарушается и он инактивируется. При встраивании элемента лекарственной устойчивости в ген, кодирующий какой-нибудь фермент биосинтеза, получается мутант с двойственным фенотипом. Потеря способности к биосинтезу того или иного соединения приводит к потребности в соответствующем питательном веществе (ауксотрофности), а экспрессия встроенной генетической информации - к лекарственной устойчивости. Оба этих фенотипа обусловлены одной и той же вставкой и при последующих генетических манипуляциях оказываются полностью сцепленными (Kleckner et al., 1975).

Такие вставки и ауксотрофность представляют большую ценность для самых разнообразных генетических манипуляций с бактериями (Kleckner et al., 1977). Например, с их помощью можно избирательно ввести в интересующий нас штамм любой определенный маркер ауксотрофности. Для этого мутацию от донора со вставкой, вызвавшей ауксотрофность (например, от штамма hisG9436 :: Tn10, инсерционного мутанта Tet^RHis^-), вводят в реципиент. Проводят отбор на наследование лекарственной устойчивости (положительный отбор). Каждый рекомбинант, получивший устойчивость (в результате обычной рекомбинации), обязательно должен приобрести и ауксотрофность донора. (Транспозиция происходит настолько редко по сравнению с рекомбинацией, что не вызывает осложнений.) Описано много примеров использования таких ауксотрофов со вставками (Kleckner et al., 1977; Chumley et al., 1979; Chumley and Roth, 1980; Schmid and Roth, 1980).

Заслуживает внимания то, каким образом возникают такие мутанты со вставками (инсерционные мутанты), так как они появляются с высокой частотой, хотя уровень мутагенеза, которому подвергаются клетки, оказывается чрезвычайно низким. Каждый из выделенных мутантов возникает в результате одного и только одного мутационного акта. По этой причине не происходит выделения мутантов с множественными повреждениями и таким образом обходится затруднение, возникающее при интенсивном химическом мутагенезе.