Обоснование и план эксперимента

Набор клонов со случайными транспозициями Tn10 получают в точности так, как это описано в эксперименте 1. Смешивают примерно 2000-5000 таких клонов и на такой смеси инсерционных мутантов бактерий выращивают фаг, осуществляющий неспецифическую трансдукцию. Затем полученным препаратом фага трансдуцируют какой-нибудь мутант по интересующей области. Проводят отбор клеток, у которых восстановлена мутантная функция (в данном случае отбирают клетки с замещенной областью purB). Каждый трансдуцированный фрагмент получен от донорной клетки, которая в какой-то точке хромосомы содержала Tn10. Вероятность того, что переданный при трансдукции фрагмент хромосомы донора с геном purB⁺ получен от клетки со вставкой Tn10, находящейся вблизи этой интересующей нас области, оказывается вполне удовлетворительной (около 0,01). В этом случае элемент Tn10 может наследоваться вместе с селектируемой областью. В действительности от 0,01 до 0,001 трансдуктантов на самом деле оказываются устойчивыми к тетрациклину (Tet^R). Большинство из них должно нести вставку Tn10 вблизи изучаемой области. (Некоторые могут быть двойными трансдуктантами, у которых элемент Tn10 встроен в каком-то сайте, несцепленном с этой областью.)