Новости     Библиотека     Словарь-справочник     Ссылки     О сайте













предыдущая главасодержаниеследующая глава

Обсуждение

Помимо чашек Red существует несколько других способов выявлять наличие или отсутствие β-лактамазы. Один из них состоит в том, чтобы лизогенизировать испытуемым фагом какого-нибудь хозяина, а затем определять устойчивость полученной лизогенной бактерии к ампициллину. Это можно сделать полуколичественною, если использовать разные концентрации этого лекарственного препарата. Для этого испытуемый фаг нанесите штрихом на газон чувствительной к ампициллину (AmpS) клетки-хозяина (например, BNN45) или просто нанесите каплю этого фага на газон. В данном конкретном случае фага λamp (который несет амбер-мутацию в гене int) клетка-хозяин должна содержать также супрессор supE или supF. Инкубируйте чашки в течение ночи при 34°С (фаг λamp обладает температурочувствительным репрессором cI857). На следующий день уколом зубочистки в центр пятна от капли или в центр бляшки (где находятся лизогенные бактерии) отберите лизогенные клетки и перенесите его на чашку LB + ампициллин, на чашку LB и (чтобы сохранить фаг) на чашку для фага λ с газоном любой чувствительной к фагу λ клетки-хозяина. На чашки LB и LB + ампициллин бактерий не добавляют, так как на них проверяют устойчивость лизогенных бактерий к ампициллину. А на чашки с фагом λ высевают клетки в мягком агаре, так что фаг на них будет сохранен.

Второй метод заключается в том, что суспензию фага капают прямо на газон клеток AmpS (например, BNN45) на чашке LB + ампициллин. Клетки в этом пятне вырастут лишь в том случае, если фаг может лизогенизировать и передавать устойчивость к ампициллину.

Третий метод состоит в использовании хромогенного субстрата с β-лактамовым кольцом (87/312 или нитроцефина). Им можно действовать непосредственно на бляшки или колонии.

предыдущая главасодержаниеследующая глава




© Злыгостев Алексей Сергеевич, подборка материалов, оцифровка, статьи, оформление, разработка ПО 2013-2017
При копировании материалов проекта обязательно ставить активную ссылку на страницу источник:
http://genetiku.ru/ "Genetiku.ru: Генетика"