Методика

1. Приготовьте для газона ночные культуры штаммов DB6430, DB6431 и DB4383 (и любых других желаемых супрессорных штаммов; см. список штаммов) в среде TYM.
2. Приготовьте культуры для газона. В данном случае культура для газона - это просто растущая экспоненциально культура плотностью около 5·10⁸ клетка/мл. Определите титр препарата фага λamp. Для этого сделайте последовательные разведения препарата фага, смешайте 0,1 мл разведения с 0,2 мл культуры для газона, инкубируйте смесь 15 мин при комнатной температуре и высейте на чашку для фага λ или на чашку Red (методика 7). Инкубируйте чашки в течение ночи при 37 или 34°С.
3. Приступайте к обработке гидроксиламином (методика 8). Чтобы определить выживаемость и появление прозрачных бляшек в процессе обработки, отбирайте пробы и высевайте различные разведения их на чашки для фага λ при 34°С. Если хотите выявить амбер-мутации в генах фага λ, то обработанные мутагеном препараты высевайте также на газон штамма DB6431, который содержит супрессор амбер-мутаций (или на любой другой супрессорный штамм; см. список штаммов). Чтобы выявить мутации, приводящие к отсутствию β-лактамазы, высевайте на чашки Red (методика 7).
4. После того как определен титр обработанных мутагеном Препаратов, высейте фаг на несколько чашек, чтобы получить на них достаточное количество мутантов.