Новости     Библиотека     Словарь-справочник     Ссылки     О сайте













предыдущая главасодержаниеследующая глава

Методика

  1. Исходя из отдельных колоний, получите жидкие культуры каждого из делеционных his-мутантов и контрольного делеционного мутанта purFXAb (TR5663) или pyrB64 (TR5671). (Эти неродственные ауксотрофы имеются среди штаммов, которые используются в эксперименте 13.)
  2. Разотрите по 0,1 мл каждого мутанта по трем чашкам (Е + 0,005 мМ гистидина). Подождите, чтобы жидкость полностью впиталась. На поверхность чашки скрещивания можно сразу нанести капли 25 разных препаратов фага, если пользоваться ящиком Бертани (матрицей), в ячейки которого внесены препараты набора донорных фагов. Делают это с помощью "паука" (штампа с 25 металлическими палочками). Пока капли не впитаются, чашки не переворачивайте. Если нет таких матриц, то капли фага можно аккуратно нанести на газон реципиента пипеткой. Инкубируйте чашки в течение двух суток при 37°С. Приготовьте одну чашку, содержащую только фаги (т. е. нанесите их на чашку без бактерий-реципиентов).
  3. Просмотрите чашки и выявите, в каких пятнах контакта донорного фага с газоном делеционного реципиента имеются рекомбинанты. Исходя из полученных данных, постройте по возможности более точную карту использованных мутаций. Если имеющиеся данные не позволяют построить однозначную карту, то следует повторить некоторые скрещивания с более высоким разрешением (нанося 0,1 мл суспензии фага и 0,1 мл ночной культуры на целую чашку).
предыдущая главасодержаниеследующая глава




© Злыгостев Алексей Сергеевич, подборка материалов, оцифровка, статьи, оформление, разработка ПО 2013-2017
При копировании материалов проекта обязательно ставить активную ссылку на страницу источник:
http://genetiku.ru/ "Genetiku.ru: Генетика"