Новости     Библиотека     Словарь-справочник     Ссылки     О сайте













предыдущая главасодержаниеследующая глава

Методика

1. Рассейте штрихом до отдельных колоний штамм RD103-HB101 (pBR322).

Проверьте штамм RD103 на устойчивость к тетрациклину и ампициллину. Проверенную культуру сохраните. Посейте 100 мл ночной культуры RD103.

Выделение ДНК pBR322

2. Следуя методике 12-I, выделите плазмидную ДНК из 100 мл культуры HB101 с плазмидой pBR332. Используйте объемы для одной пробирки от ротора 50 Ti.

Из градиента отберите ДНК pBR322 и экстрагируйте из нее бромистый этидий. Осадите ДНК этиловым спиртом или диализуйте ее против 0,1 M NaCl, 0,05 М и трис (рН 7,5) и 0,1 мМ Na2-ЭДТА.

Вырастите ночные культуры штамма RD102-HB101/λ.

Выделение ДНК фага λ

3. Следуя методике 11-I, выделите ДНК фага λ, используя примерно половину препарата фага.

Перенесите фрагмент (фрагменты) ДНК из фага λ, в плазмиду pBR322. Расщепите ДНК рестриктазой EcoRI или смесью рестриктаз. Возьмите 20-50 частей (по весу) ДНК гибридного фага λ, на 1 часть ДНК плазмиды pBR322. Ковалентно соедините их, обработав ДНК-лигазой фага T4. Проведите трансфекцию клеток RD102, проводя отбор либо на устойчивость к тетрациклину, либо на устойчивость к ампициллину.

предыдущая главасодержаниеследующая глава




© Злыгостев Алексей Сергеевич, подборка материалов, оцифровка, статьи, оформление, разработка ПО 2013-2017
При копировании материалов проекта обязательно ставить активную ссылку на страницу источник:
http://genetiku.ru/ "Genetiku.ru: Генетика"