Каждая группа использует по две случайные неохарактеризованные вставки Tn10 в хромосому Salmonella (полученные в эксперименте 1). Должно быть определено положение этих элементов Tn10 на генетической карте и их ориентация. Идея заключается в том, чтобы встроить плазмиду F′tsTn10lac+ в тот элемент Tn10, который находится в хромосоме. Полученный в результате этого штамм Hfr скрещивают затем с различными реципиентами, определяя в результате точку начала его переноса и направление переноса. Таким образом, определяется локализация и ориентация последовательностей Tn10 в хромосоме.