Обсуждение

1. Эти эписомы F′_ts несут мутацию, которая препятствует их репликации при 40°С. Они содержат также lac⁺-оперон дикого типа и вставку Tn10 в известной ориентации. Эписомы в штаммах TT627 и TT629 содержат Tn10 в одной ориентации (ориентации А). В эписоме штамма TT628 Tn10 встроен в противоположной ориентации (ориентации В) по отношению к направлению переноса.
2. Обычно клетки Salmonella являются Lac^-, но могут стать Lac⁺, если получат эписому F′lac⁺ от E. coll Эти чашки следует инкубировать при 30°С, чтобы могли происходить перенос и репликация мутантной эписомы F′.
3. В штрихах из пятен скрещивания могут появиться также и крошечные колонии. Это колонии реципиента Lac^-, выросшие на попавших с каплей пищевых добавках или из-за перекрестного питания, обеспечиваемого большими колониями Lac⁺. Поэтому в данном эксперименте отбирайте уколом лишь большие колонии.
4. Чтобы избежать вырезания F′lac⁺, штаммы Hfr выращивают в селективных условиях. Важно быстро выделить и использовать эти штаммы Hfr. Если перед тем, как их использовать, с этими штаммами длительно работали (т. е. проводили повторную их очистку или хранили их), то в них могли произойти перестройки, затрудняющие интерпретацию полученных результатов. Если же штаммы Hfr использовали сразу же после их выделения, то ориентация вставок Tn10 может быть определена однозначно.

Литература

Chumley F. G., Menzel R., Roth J. R., 1979. Hfr formation directed by Tn10, Genetics, 91, 639.