Обсуждение
I. Для газона можно использовать клетки любого штамма, на котором образуются четко выраженные бляшки. Многие штаммы E. coli устойчивы к заражению фагом λ (они обозначаются как /λ). Большинство амбер-мутаций фага λ может супрессироваться супрессором supE (su2+), который присутствует в штамме C600. Имеющаяся во многих штаммах фага λ мутация λSam7 супрессируется супрессором supF (su3+), который есть в штамме BNN45 в дополнение к супрессору supE. Белок бактерии, на котором адсорбируется фаг λ, кодируется геном, входящим в состав индуцируемого мальтозой mal-оперона. Поэтому клетки, выращенные на мальтозе (в среде TYM), очень хорошо адсорбируют фаг λ. Однако при высеве фага чашки не должны содержать мальтозы, так как вторичная адсорбция на чашке приводит к снижению конечного выхода фага. Стационарную культуру можно хранить в растворе MgSO4. Если же высев проводят сразу после ее получения, то можно использовать непосредственно выращенную культуру. Культуру можно хранить в MgSO4 при 5°С до двух недель. Однако эффективность высева оказывается наибольшей, а морфология бляшек оказывается более однородной, если пользоваться клетками, полученными не более чем за 1 сутки до опыта. Высев фага P22 оказывается наилучшим при использовании экспоненциальных культур Salmonella, хранившихся на холоду не более 36 ч.
II. А. Фаг рассеивают штрихом точно так же, как культуры бактерий. Используйте для этого либо чашку для фага λ, либо чашку LB. На чашках для фага λ бляшки получаются большего размера. Размер бляшек увеличивается также, если использовать для газона меньше клеток. Поскольку предадсорбция фага не проводится, то акты, инфицирования, приводящие к образованию бляшек, могут быть сильно растянуты во времени. Поэтому размер бляшек может варьировать. В данном случае вариабельность размера бляшек не обязательно указывает на гетерогенность генотипа фага. Этот метод очень удобен для тех, у кого мало опыта, однако он имеет тот недостаток, что на каждой чашке можно провести очистку лишь одного фага.
Б. Эта методика сложнее, чем методика А, но она обладает тем преимуществом, что на одной чашке можно рассеять штрихом одновременно н