Новости     Библиотека     Словарь-справочник     Ссылки     О сайте













предыдущая главасодержаниеследующая глава

III. Сбор фага

  1. После того как наступит сплошной лизис (примерно через 6 ч), охладите чашки, перенеся их в холодную комнату.
  2. Налейте по 5 мл холодной среды для разведения фага λ (10 мМ трис, рН 7,5 и 10 мМ MgSO4) на чашку. Оставьте чашки на ночь в холодной комнате.
  3. Соберите налитую на чашки жидкость, добавьте в нее 2 капли CHCl3 (с этанолом). На этой стадии неочищенный препарат фага может храниться при 5°С в течение нескольких лет. Можно заложить его и на длительное хранение (см. приложение 3). Если полученный препарат фага λ будет использован для выделения ДНК, то нужно тщательно избегать загрязнения суспензии фага кусочками агара и перейти к следующему этапу.
  4. Чтобы удалить обломки клеток, проведите низкоскоростное центрифугирование (около 10000 об/мин в течение 10 мин) в роторе Sorvall, SS-34 или Beckman JA-20.
  5. Чтобы осадить фаг, центрифугируйте в течение 3 ч при 20000 об/мин.
  6. Ресуспендируйте фаг в 1 мл среды для разведения фага λ (см. обсуждение). Перенесите суспензию в пробирку на 1,5мл от микрофуги Eppendorf и центрифугируйте в течение 5 с, чтобы удалить остатки обломков клеток. Полученные на этой стадии препараты можно использовать для выделения ДНК, а можно и хранить.
  7. Для дальнейшей очистки фага (и чтобы получить более устойчивые препараты) следуйте методике 4-IA.

С одной чашки получается примерно 4 мл суспензии фага с концентрацией 2·1010 частица/мл или около 10 мкг очищенной ДНК.

предыдущая главасодержаниеследующая глава




© Злыгостев Алексей Сергеевич, подборка материалов, оцифровка, статьи, оформление, разработка ПО 2013-2017
При копировании материалов проекта обязательно ставить активную ссылку на страницу источник:
http://genetiku.ru/ "Genetiku.ru: Генетика"