Новости     Библиотека     Словарь-справочник     Ссылки     О сайте













предыдущая главасодержаниеследующая глава

Методика 3. Быстрый метод получения трансдуцирующего фага P22

  1. Засейте 1 мл бульона LB тем штаммом, который хотите использовать в качестве донора. Вырастите культуру до насыщения. После инкубации в течение ночи при 37°С культура должна содержать 2·109 клетка/мл.
  2. Заразите фагом P22 (HT, int-) с множественностью 0,01-0,1 фаговых частиц на клетку. Обычно к 1 мл ночной культуры добавляют 4 мл бульона P22. Бульон P22 - это бульон LB с полным количеством солей E (1x), содержащий 0,2% глюкозы и 5·106 БОЕ/мл фага P22 (HT, int-). В такой среде фаг довольно стабилен при комнатной температуре. Используемый мутант фага P22 осуществляет неспецифическую трансдукцию с повышенной частотой (HT; Schmieger, 1972) и не образует устойчивых лизогенов (int-).
  3. Инкубируйте в течение 5-18 ч при 37°С при встряхивании. Культура может не просветлеть.
  4. Низкоскоростным центрифугированием удалите клетки и их обломки.
  5. Надосадочную жидкость перенесите в пробирку с 0,5 мл хлороформа, перемешайте в смесителе.
  6. Оттитруйте лизат (см. методику 1). Он должен содержать 1010-1011 частиц фага в 1 мл.
предыдущая главасодержаниеследующая глава




© Злыгостев Алексей Сергеевич, подборка материалов, оцифровка, статьи, оформление, разработка ПО 2013-2017
При копировании материалов проекта обязательно ставить активную ссылку на страницу источник:
http://genetiku.ru/ "Genetiku.ru: Генетика"