Методика 3. Быстрый метод получения трансдуцирующего фага P22

1. Засейте 1 мл бульона LB тем штаммом, который хотите использовать в качестве донора. Вырастите культуру до насыщения. После инкубации в течение ночи при 37°С культура должна содержать 2·10⁹ клетка/мл.
2. Заразите фагом P22 (HT, int^-) с множественностью 0,01-0,1 фаговых частиц на клетку. Обычно к 1 мл ночной культуры добавляют 4 мл бульона P22. Бульон P22 - это бульон LB с полным количеством солей E (1x), содержащий 0,2% глюкозы и 5·10⁶ БОЕ/мл фага P22 (HT, int^-). В такой среде фаг довольно стабилен при комнатной температуре. Используемый мутант фага P22 осуществляет неспецифическую трансдукцию с повышенной частотой (HT; Schmieger, 1972) и не образует устойчивых лизогенов (int^-).
3. Инкубируйте в течение 5-18 ч при 37°С при встряхивании. Культура может не просветлеть.
4. Низкоскоростным центрифугированием удалите клетки и их обломки.
5. Надосадочную жидкость перенесите в пробирку с 0,5 мл хлороформа, перемешайте в смесителе.
6. Оттитруйте лизат (см. методику 1). Он должен содержать 10¹⁰-10¹¹ частиц фага в 1 мл.