НОВОСТИ    БИБЛИОТЕКА    СЛОВАРЬ-СПРАВОЧНИК    КАРТА САЙТА    ССЫЛКИ    О САЙТЕ

предыдущая главасодержаниеследующая глава

Обсуждение

I. Эта методика получения дефектного трансдуцирующего фага описана Клекнером и др. (Kleckner et al., 1975). Фаг получают при индукции лизогенного штамма NK337 под действием высокой температуры. Генотип штамма NK337: hisC527 leu-414 supE (P22 c2ts29 12amN11 13amH101 int-STn10).

Имеющийся в этом штамме супрессор супрессирует амбер-мутации в генах 12 и 13 фага. Индукция при 40°С происходит из-за мутации c2ts29. Мутация в гене int фага обусловливает высокую частоту неправильного вырезания профага, и в результате фаги получаются дефектными, но включают элемент Tn10.

II. Методика транспозиции при трансдукции основана на том, что клетки заражают фагом с Tn10 таким образом, что интеграция транспозона в результате лизогенизации или в результате обычной рекомбинации оказывается невозможной. Фаг, несущий Tn10, является c2ts, и поэтому при высокой температуре не может установиться состояние репрессии. Этот фаг также мутантен по генам 12 и 13, так что в реципиентных su--клетках происходит лишь очень незначительная репликация такого полного фага. Наконец, мутация int- приводит к тому, что большинство фагов в препарате оказывается дефектными из-за неправильного вырезания (см. выше разделы о выращивании дефектного фага Р22 и соединении его с отростками).

Мутация int- у реципиента препятствует также интеграции генома любого фага, избежавшего действия указанных выше рестрикций. Предотвращается также и гомологичная рекомбинация, так как транспозон Tn10 встроен в геном фага, а используемый реципиент не содержит фаговых последовательностей.

Трансдукционные чашки содержат ЭГТА, который хелатирует ионы Ca2+ и тем самым препятствует адсорбции фага. В результате предотвращается размножение на трансдукционной чашке жизнеспособного фага. Использовать чашки Green не обязательно, но они недороги и позволяют выявлять те колонии, в которых размножается фаг (такие колонии оказываются темно-зелеными). Незаряженные колонии и колонии стабильных лизогенов оказываются бледно-окрашенными.

Литература

Israel J. V., Anderson T. F., Levine M., 1967. In vitro morphogenesis of phage P22 from heads and base-parts, Proc. Natl. Acad. Sci., 57, 284.

Kleckner N., Chen R., Tye B.-K., Botstein D., 1975. Mutagenesis by insertion of a drug-resistance element carrying an inverted repetition, j. Mol. Biol., 97, 561.

предыдущая главасодержаниеследующая глава






Генетики нашли в ДНК мужчин следы древней «войны кланов»

Европейцы и азиаты посветлели независимо друг от друга

Современные высшие растения возникли в результате сдвига экспрессии генов

Генетики нашли «семью», состоящую из 13 миллионов человек

Прочитали рекордный по длине геном мексиканской амбистомы - 32 миллиарда пар нуклеотидных оснований

ДНК человека, умершего в 1827 году, восстановили без его останков

Генетики изучили жителей Новой Гвинеи

Ученые добавили две новые буквы в генетический код

В наших генах есть два «неандертальских процента»

Сколько у вас хромосом? История одной мутации

Инвестиции в редактирование генома

Распространение артритов объяснили исходом человека из Африки

Обнаружены гены, отвечающие за чувствительность к магнитному полю Земли

Вредные мутации в геноме усиливают влияние друг друга

Найдены 6 500 генов, отличающие мужчин от женщин

Антропологи извлекли ДНК древних людей из пещер без костных останков

Расшифровка генома ячменя принесла больше вопросов, чем ответов

Сибирские генетики сделали первые шаги к управлению фотосинтезом

Александр Баев – один из пионеров исследований генома человека

215 петабайт в одном грамме ДНК




© Злыгостев Алексей Сергеевич, подборка материалов, оцифровка, статьи, оформление, разработка ПО 2013-2018
При копировании материалов проекта обязательно ставить активную ссылку на страницу источник:
http://genetiku.ru/ 'Genetiku.ru: Генетика'

Рейтинг@Mail.ru