НОВОСТИ    БИБЛИОТЕКА    СЛОВАРЬ-СПРАВОЧНИК    КАРТА САЙТА    ССЫЛКИ    О САЙТЕ

предыдущая главасодержаниеследующая глава

III. Транспозиция при трансдукции

  1. Вырастите реципиентные клетки в бульоне LB до плотности 5·108 клетка/мл.
  2. С помощью центрифугирования (5000 об/мин, 10 мин) сконцентрируйте клетки в 10 раз (ресуспендируйте осадок в 1/10 исходного объема).
  3. Заразите фагом с множественностью заражения 0,8 частицы на клетку. Проведите адсорбцию в бульоне LB в течение 30 мин при 37°С.
  4. Высейте зараженные клетки на чашки Green + тетрациклин (25 мкг/мл) + ЭГТА (10 мМ). Чашки инкубируйте при 4ГС. Переколите колонии и выявите среди них мутантов.
  5. Колонии TetR должны появляться с частотой 1 на 105-106 зараженных клеток. Если используется описанная выше методика и если считать, что добавляется очень небольшой объем фага, то 0,1 мл зараженных клеток приводит к образованию 200 колоний TetR. Около 1% клонов TetR оказываются аукстрофами.
предыдущая главасодержаниеследующая глава