III. Транспозиция при трансдукции

1. Вырастите реципиентные клетки в бульоне LB до плотности 5·10⁸ клетка/мл.
2. С помощью центрифугирования (5000 об/мин, 10 мин) сконцентрируйте клетки в 10 раз (ресуспендируйте осадок в ¹/₁₀ исходного объема).
3. Заразите фагом с множественностью заражения 0,8 частицы на клетку. Проведите адсорбцию в бульоне LB в течение 30 мин при 37°С.
4. Высейте зараженные клетки на чашки Green + тетрациклин (25 мкг/мл) + ЭГТА (10 мМ). Чашки инкубируйте при 4ГС. Переколите колонии и выявите среди них мутантов.
5. Колонии Tet^R должны появляться с частотой 1 на 10⁵-10⁶ зараженных клеток. Если используется описанная выше методика и если считать, что добавляется очень небольшой объем фага, то 0,1 мл зараженных клеток приводит к образованию 200 колоний Tet^R. Около 1% клонов Tet^R оказываются аукстрофами.