Обсуждение

При работе со штаммами, несущими элемент Tn10, часто бывает полезно уметь отбирать мутантов, утративших устойчивость к тетрациклину. Такая утрата транспозона дает возможность повторно использовать Tn10 при конструировании штаммов и, кроме того, позволяет проводить отбор делений и инверсий, индуцированных Tn10. Описанная здесь методика такого отбора разработана Бохнером и др. (Bochner et al., 1980). Детальные основы такого отбора не вполне ясны, но известно следующее:

1. При автоклавировании хлортетрациклин превращается в соединение, индуцирующее функцию устойчивости, присущую Tn10. Это индуцирующее соединение не токсично для клеток.
2. Рост клеток, у которых индуцирована устойчивость к тетрациклину, подавляется фузаровой и хинальдиновой кислотами. Те клетки, которые в результате мутации утратили детерминанты устойчивости к тетрациклину, становятся устойчивыми к фузаровой или хинальдиновой кислоте.
3. Фузаровая и хинальдиновая кислоты представляют собой липидорастворимые вещества, способные хелатировать двухвалентные катионы.
4. Если в среду добавлено железо или марганец, то хинальдиновая и фузаровая кислоты уже не оказывают ингибирующего действия.
5. Важно, чтобы высевались небольшие количества клеток (<10⁶ на чашку).

Литература

Bochner В., Huang H.-C, Schieven G., Ames В. N., 1980. Positive selections for loss of tetracycline resistance, J. Bacterid., 143, 926.