Методика 7. Выявление фага λ с функционирующим геном β-лактамазы на чашках Red

Эта методика позволяет визуально выявлять фаги с функционирующим геном β-лактамазы. Ее можно использовать для идентификации таких производных фага λamp, у которых мутация приводит к дефекту по β-лактамазе. Суть этой методики обсуждается ниже.

1. Накануне эксперимента разлейте чашки Red (приложение 1).
2. Вырастите культуры DB6430 и DB4383 в бульоне TYM при 37°С до плотности 3·10⁸ клетка/мл. Перед использованием не храните их очень долго (даже во льду).
3. Разведите фаг так, чтобы при высеве на чашку 0,1 мл разведения образовалось 40-100 бляшек. Добавьте 0,1 мл такого разведения фага к 0,1 мл культуры DB4383 и инкубируйте смесь в течение 20 мин при комнатной температуре.
4. К этой смеси добавьте 0,1 мл культуры DB6430, смешайте с 2,5 мл верхнего агара для фага К и вылейте на чашку Red. Инкубируйте при 34°С.
5. Через 25 ч после высева поглядите на чашки и затем проделывайте это каждые несколько часов.
6. Важно проверить эту методику, высеяв контрольные фаги (просто λamp, λ без amp и смесь этих фагов).