НОВОСТИ    БИБЛИОТЕКА    СЛОВАРЬ-СПРАВОЧНИК    КАРТА САЙТА    ССЫЛКИ    О САЙТЕ

предыдущая главасодержаниеследующая глава

Методика 10. Тесты на рекомбинацию и комплементацию фага in vivo

I. Стандартное скрещивание (для определения частоты рекомбинации или для создания рекомбинанта)

  1. Вырастите ночную культуру бактериального штамма, пермиссивного для обоих фагов, которые вы будете скрещивать. Определите точный титр каждого из этих фагов (методика 1).
  2. Разведите культуру 1/1000 в среде TYM (если скрещиваете фаги λ) или в среде LB (если скрещиваете фаги P22) и подрастите культуру до плотности не выше, чем 2·108 клетка/мл (по Клетту, это 40; можно пользоваться также камерой Петрова - Хауссера).
  3. Осадите клетки центрифугированием и ресуспендируйте их в холодной среде для разведения фага λ (если скрещиваете фаги λ) или в забуференном физиологическом растворе (если скрещиваете фаги P22). Ресуспендируйте таким образом, чтобы получилась плотность 4·108 клетка/мл.
  4. Каждый из родительских фагов разведите до титра 4·109 фаг/мл. Смешайте их вместе в соотношении 1:1.
  5. 0,2 мл смеси фагов добавьте к 0,2 мл суспензии клеток и проведите адсорбцию в течение 15 мин при 37°С.
  6. Разведите в 104 раз в бульоне LB (но не TYM), предварительно прогретом до 37°С, и инкубируйте в течение 90 мин. После этого добавьте 2 капли хлороформа.
  7. Оттитруйте при условиях, которые пермиссивны для обоих родительских фагов (чтобы определить полный титр потомства), и при условиях, непермиссивных ни для одного из фагов-родителей (чтобы определить титр рекомбинатов). Частота рекомбинации = (2×титр в непермиссивных условиях): (полный титр потомства).
предыдущая главасодержаниеследующая глава






Генетики нашли в ДНК мужчин следы древней «войны кланов»

Европейцы и азиаты посветлели независимо друг от друга

Современные высшие растения возникли в результате сдвига экспрессии генов

Генетики нашли «семью», состоящую из 13 миллионов человек

Прочитали рекордный по длине геном мексиканской амбистомы - 32 миллиарда пар нуклеотидных оснований

ДНК человека, умершего в 1827 году, восстановили без его останков

Генетики изучили жителей Новой Гвинеи

Ученые добавили две новые буквы в генетический код

В наших генах есть два «неандертальских процента»

Сколько у вас хромосом? История одной мутации

Инвестиции в редактирование генома

Распространение артритов объяснили исходом человека из Африки

Обнаружены гены, отвечающие за чувствительность к магнитному полю Земли

Вредные мутации в геноме усиливают влияние друг друга

Найдены 6 500 генов, отличающие мужчин от женщин

Антропологи извлекли ДНК древних людей из пещер без костных останков

Расшифровка генома ячменя принесла больше вопросов, чем ответов

Сибирские генетики сделали первые шаги к управлению фотосинтезом

Александр Баев – один из пионеров исследований генома человека

215 петабайт в одном грамме ДНК




© Злыгостев Алексей Сергеевич, подборка материалов, оцифровка, статьи, оформление, разработка ПО 2013-2018
При копировании материалов проекта обязательно ставить активную ссылку на страницу источник:
http://genetiku.ru/ 'Genetiku.ru: Генетика'

Рейтинг@Mail.ru