НОВОСТИ    БИБЛИОТЕКА    СЛОВАРЬ-СПРАВОЧНИК    КАРТА САЙТА    ССЫЛКИ    О САЙТЕ

предыдущая главасодержаниеследующая глава

Обсуждение

Для поддержания структурной целостности головки фага λ необходимы ионы магния. Удаление их хелатирующими соединениями, например ЭДТА или пирофосфатом, приводит к разрушению тех головок фага λ, в которых содержание ДНК больше, чем 96% от содержания ДНК в фаге дикого типа. Поэтому, действуя хелатирующими соединениями на препараты фага λ, можно отобрать из них естественно возникающие там делении. Обычно для этого необходимо провести несколько циклов отбора, так как в любой популяции присутствуют природные варианты фага λ (λ*), устойчивые к хелатирующим соединениям не потому, что они содержат меньше ДНК, а по другим причинам (возможно, потому, что у них повышено содержание белка). Обычно при этих последующих циклах проводят высев на чашки с хелатирующим соединением. Более подробно об этой методике см. в работе Паркинсона и Хаски (Parkinson and Huskey, 1971). Необходимо начать работу с фага, геном которого достаточно велик, чтобы он был чувствителен к таким хелатирующим соединениям, как ЭДТА. Проще всего определить это эмпирическим путем с помощью чашек с ЭДТА. Чтобы проверить фаг, нанесите его штрихом на газон E. coli на чашке с триптиказой и ЭДТА (1 мМ). (В зависимости от партии триптиказы или агара необходимая концентрация ЭДТА может варьировать.) Используйте верхний агар также с триптиказой и ЭДТА. Параллельно с такой проверкой фага на среде с ЭДТА нанесите фаг штрихом и на обычные чашки для фага λ с верхним агаром для этого фага. На каждую чашку нанесите и штрихи контрольных фагов λ+ (дикий тип), и λ cI857 b515 b519 nin5 intam29. Сравните размеры бляшек, появившихся после инкубации в течение ночи при 42°С. Чувствительный к ЭДТА фаг образует крошечные бляшки (или вообще не образует их). Важно проводить проверку именно путем рассева до отдельных бляшек, так как на основании спот-теста надежных выводов сделать нельзя.

Литература

Parkinson J. S., Huskey R. J., 1971. Deletion mutants of bacteriophage lambda. Isolation and initial characterization, J. Mol. Biol., 56, 369.

предыдущая главасодержаниеследующая глава






Ученые добавили две новые буквы в генетический код

В наших генах есть два «неандертальских процента»

Сколько у вас хромосом? История одной мутации

Инвестиции в редактирование генома

Распространение артритов объяснили исходом человека из Африки

Обнаружены гены, отвечающие за чувствительность к магнитному полю Земли

Вредные мутации в геноме усиливают влияние друг друга

Найдены 6 500 генов, отличающие мужчин от женщин

Антропологи извлекли ДНК древних людей из пещер без костных останков

Расшифровка генома ячменя принесла больше вопросов, чем ответов

Сибирские генетики сделали первые шаги к управлению фотосинтезом

Александр Баев – один из пионеров исследований генома человека

215 петабайт в одном грамме ДНК




© Злыгостев Алексей Сергеевич, подборка материалов, оцифровка, статьи, оформление, разработка ПО 2013-2018
При копировании материалов проекта обязательно ставить активную ссылку на страницу источник:
http://genetiku.ru/ 'Genetiku.ru: Генетика'

Рейтинг@Mail.ru