Новости     Библиотека     Словарь-справочник     Ссылки     О сайте













предыдущая главасодержаниеследующая глава

Методика 9. Отбор делеционных мутантов фага λ

  1. Получите на чашках препарат чувствительного к ЭДТА фага (см. обсуждение). Фаг элюируйте из агара раствором для разведения фага λ без магния. Можно также развести обычный препарат фага в 5 раз средой для разведения фага λ без магния.
  2. Разведите такой препарат фага, содержащий мало магния, в 10 мМ ЭДТА (рН 7). Если титр фага в препарате оказался слишком низким, чтобы его можно было разводить (ниже, чем 1010 частица/мл), то можно просто добавить в него ЭДТА до конечной концентрации 10 мМ, учитывая при этом, конечно, содержание Mg2+ в препарате.
  3. Инкубируйте в течение 30 мин при 48°С. Титр фага должен упасть в 104-105 раз. Если отбираются более протяженные делении или если отбираются делении среди малочувствительных препаратов фага, то инкубировать можно и при более высокой температуре.
  4. Из обработанного препарата (содержащего не менее 105 частица/мл) отберите 0,1 мл и используйте этот объем для получения нового препарата фага на чашке. В методике 2 описано, как это сделать. Пользуйтесь чашками для фага λ.
  5. Полученный новый препарат фага опять прогрейте с ЭДТА, как это делалось на этапах 1-3. Титр должен упасть не более чем в 103 раз.
  6. Суспензию фага, прошедшего повторную обработку, высейте для получения отдельных бляшек. Их можно переколоть и каждую по отдельности проверить на наличие мутаций (как описано в методике 8). Можно также высеять суспензию на индикаторные чашки, которые позволяют прямо идентифицировать мутантов (например, на чашки Red, как это описано в методике 7).
предыдущая главасодержаниеследующая глава




© Злыгостев Алексей Сергеевич, подборка материалов, оцифровка, статьи, оформление, разработка ПО 2013-2017
При копировании материалов проекта обязательно ставить активную ссылку на страницу источник:
http://genetiku.ru/ "Genetiku.ru: Генетика"