Новости     Библиотека     Словарь-справочник     Ссылки     О сайте













предыдущая главасодержаниеследующая глава

Методика 13. Удаление бромистого этидия из ДНК, находящейся в растворе CsCl

Экстракция изопропанолом или бутанолом

  1. Добавьте 1 объем ДНК в растворе CsCl, плотность которого равна плавучей плотности ДНК, и бромистый этидий в пробирку, вмещающую по меньшей мере 10 таких объемов. Пробирку нужно взять такую, чтобы ее можно было герметически закупорить и центрифугировать (можно использовать полипропиленовые или стеклянные пробирки, но ни в коем случае не пробирки из поликарбоната).
  2. Добавьте 1 объем изопропанола или бутанола, насыщенного водным раствором, содержащим 5 М NaCl, 10 мМ трис и 1 мМ Na3-ЭДТА (рН 8,5).
  3. Герметично закройте пробирку и перемешайте содержимое. Это нужно проделывать в перчатках.
  4. Повторяйте экстракцию до тех пор, пока полностью не исчезнет видимая окраска. После этого экстрагируйте еще один раз. Чем выше концентрация ДНК, тем больше требуется проводить экстракций.
  5. Добавьте 2 объема H2O.
  6. Добавьте 6 объемов этанола и оставьте при -20°С на время от 1 ч до нескольких дней.
  7. Отцентрифугируйте осадок.
  8. Промойте осадок 70%-ным этанолом.
  9. Слейте надосадочную жидкость и высушите осадок.
  10. Растворите осадок в 100 мкл 10 мМ трис и 1 мМ Na3-ЭДТА (рН 7,5).
предыдущая главасодержаниеследующая глава




© Злыгостев Алексей Сергеевич, подборка материалов, оцифровка, статьи, оформление, разработка ПО 2013-2017
При копировании материалов проекта обязательно ставить активную ссылку на страницу источник:
http://genetiku.ru/ "Genetiku.ru: Генетика"