Методика 13. Удаление бромистого этидия из ДНК, находящейся в растворе CsCl

Экстракция изопропанолом или бутанолом

1. Добавьте 1 объем ДНК в растворе CsCl, плотность которого равна плавучей плотности ДНК, и бромистый этидий в пробирку, вмещающую по меньшей мере 10 таких объемов. Пробирку нужно взять такую, чтобы ее можно было герметически закупорить и центрифугировать (можно использовать полипропиленовые или стеклянные пробирки, но ни в коем случае не пробирки из поликарбоната).
2. Добавьте 1 объем изопропанола или бутанола, насыщенного водным раствором, содержащим 5 М NaCl, 10 мМ трис и 1 мМ Na₃-ЭДТА (рН 8,5).
3. Герметично закройте пробирку и перемешайте содержимое. Это нужно проделывать в перчатках.
4. Повторяйте экстракцию до тех пор, пока полностью не исчезнет видимая окраска. После этого экстрагируйте еще один раз. Чем выше концентрация ДНК, тем больше требуется проводить экстракций.
5. Добавьте 2 объема H₂O.
6. Добавьте 6 объемов этанола и оставьте при -20°С на время от 1 ч до нескольких дней.
7. Отцентрифугируйте осадок.
8. Промойте осадок 70%-ным этанолом.
9. Слейте надосадочную жидкость и высушите осадок.
10. Растворите осадок в 100 мкл 10 мМ трис и 1 мМ Na₃-ЭДТА (рН 7,5).