Методика 14. Образование гибридных фагов λgt

I. Расщепление ДНК

1. Расщепите по отдельности ДНК вектора и встраиваемую ДНК. Если использовать примерно по 5 мкг каждой из этих ДНК, то при трансфекции должно получиться около 5·10⁴ гибридов. ДНК в буфере: ДНК 50 мкг/мл или больше, буфер для рестрикции с низким, средним или высоким содержанием соли (см. приложение 7), 10^-4 М Na₂-ЭДТА.
2. Добавьте ¹/₁₀ объема 0,1 М MgSO₄, чтобы получить 0,01 М MgSO₄.
3. Добавьте эндонуклеазу и инкубируйте в течение 10 мин при 37°С. Проведя электрофорез в геле, определите то количество фермента, которое дает полное расщепление.
4. Повторите этап 3.
5. Прогрейте в течение 3 мин при 70°С, чтобы инактивировать эндонуклеазу (см. приложение 7).
6. Если будете использовать эту ДНК для упаковки in vitro, то инкубируйте в течение 15 мин при 50°С. Если же будете использовать ее в трансфекции, то быстро охладите до 0°С.