НОВОСТИ    БИБЛИОТЕКА    СЛОВАРЬ-СПРАВОЧНИК    КАРТА САЙТА    ССЫЛКИ    О САЙТЕ

предыдущая главасодержаниеследующая глава

Методика 14. Образование гибридных фагов λgt

I. Расщепление ДНК

  1. Расщепите по отдельности ДНК вектора и встраиваемую ДНК. Если использовать примерно по 5 мкг каждой из этих ДНК, то при трансфекции должно получиться около 5·104 гибридов. ДНК в буфере: ДНК 50 мкг/мл или больше, буфер для рестрикции с низким, средним или высоким содержанием соли (см. приложение 7), 10-4 М Na2-ЭДТА.
  2. Добавьте 1/10 объема 0,1 М MgSO4, чтобы получить 0,01 М MgSO4.
  3. Добавьте эндонуклеазу и инкубируйте в течение 10 мин при 37°С. Проведя электрофорез в геле, определите то количество фермента, которое дает полное расщепление.
  4. Повторите этап 3.
  5. Прогрейте в течение 3 мин при 70°С, чтобы инактивировать эндонуклеазу (см. приложение 7).
  6. Если будете использовать эту ДНК для упаковки in vitro, то инкубируйте в течение 15 мин при 50°С. Если же будете использовать ее в трансфекции, то быстро охладите до 0°С.
предыдущая главасодержаниеследующая глава









© Злыгостев А.С., подборка материалов, оцифровка, статьи, оформление, разработка ПО 2013-2019
При использовании материалов активная ссылка обязательна:
http://genetiku.ru/ 'Генетика'

Рейтинг@Mail.ru