II. Ковалентное соединение с помощью ДНК-лигазы фага Т4

1. Смешайте равные по весу количества ДНК вектора и встраиваемой ДНК.
2. Добавьте АТР до конечной концентрации 1 мМ.
3. Добавьте ДТТ до конечной концентрации 10 мМ.
4. На 1 мкг ДНК добавьте 0,1 ед. ДНК-лигазы фага Т4 или 0,1 мкл раствора лигазы 1 мг/мл.
5. Инкубируйте в течение 1-6 ч при 0-10°С.
6. Под электронным микроскопом или с помощью электрофореза в геле проверьте, произошло ли ковалентное соединение.
7. Проведите заражение этой ДНК или упакуйте ее.

Литература

Thomas M., Cameron J. R., Davis R. W., 1974. Viable molecular hybrids of bacteriophage lambda and eukaryotic DNA, Proc. Natl. Acad. Sci., 71, 4579.