Новости     Библиотека     Словарь-справочник     Ссылки     О сайте













предыдущая главасодержаниеследующая глава

II. Ковалентное соединение с помощью ДНК-лигазы фага Т4

  1. Смешайте равные по весу количества ДНК вектора и встраиваемой ДНК.
  2. Добавьте АТР до конечной концентрации 1 мМ.
  3. Добавьте ДТТ до конечной концентрации 10 мМ.
  4. На 1 мкг ДНК добавьте 0,1 ед. ДНК-лигазы фага Т4 или 0,1 мкл раствора лигазы 1 мг/мл.
  5. Инкубируйте в течение 1-6 ч при 0-10°С.
  6. Под электронным микроскопом или с помощью электрофореза в геле проверьте, произошло ли ковалентное соединение.
  7. Проведите заражение этой ДНК или упакуйте ее.

Литература

Thomas M., Cameron J. R., Davis R. W., 1974. Viable molecular hybrids of bacteriophage lambda and eukaryotic DNA, Proc. Natl. Acad. Sci., 71, 4579.

предыдущая главасодержаниеследующая глава




© Злыгостев Алексей Сергеевич, подборка материалов, оцифровка, статьи, оформление, разработка ПО 2013-2017
При копировании материалов проекта обязательно ставить активную ссылку на страницу источник:
http://genetiku.ru/ "Genetiku.ru: Генетика"