НОВОСТИ    БИБЛИОТЕКА    СЛОВАРЬ-СПРАВОЧНИК    КАРТА САЙТА    ССЫЛКИ    О САЙТЕ

предыдущая главасодержаниеследующая глава

II. Окрашивание ДНК в агарозных гелях

Предостережение. Бромистый этидий, продукты его метаболизма и акридиновый оранжевый являются мутагенами. В тесте Эймса 90 мкг бромистого этидия или 80 мкг акридинового оранжевого приводят к такому же результату, как конденсат дыма от одной сигареты или 2 мкг нитрозогуанидина. Поэтому при работе с их растворами надевайте перчатки.

А. Бромистый этидий

Бромистый этидий является интеркалирующим агентом и связывается с двухцепочечной нуклеиновой кислотой. Ультрафиолетовый свет, поглощенный бромистым этидием (300 нм) или ДНК (260 нм), но затем переданный бромистому этидию, испускается в виде флуоресценции при 590 нм. Наилучшее окрашивание получается, если перед проведением электрофореза нуклеиновых кислот в гель и в электрофорезный буфер внести бромистый этидий в концентрации примерно 0,5 мкг/мл. Гель можно окрасить и после окончания электрофореза, вымочив его в буфере с 0,5 мкг/мл бромистого этидия в течение примерно 1 ч. В обоих случаях не обязательно проводить отмывку геля от красителя. Можно прокрасить и одноцепочечную нуклеиновую кислоту. Для этого нужно погрузить гель на 1 ч в 1 мМ MgSO4 с 5 мкг/мл бромистого этидия, а затем отмыть краситель в 1 мМ MgSO4 в течение 1 ч.

Имеющийся в продаже бромистый этидий содержит много примесей (на долю самого бромистого этидия приходится лишь около половины веса препарата). Его концентрацию можно опредилить спектрофотометрически.

А480 = 5700 М-1см-1, а молекулярная масса = 394 г/моль.

Б. Акридиновый оранжевый

Акридиновый оранжевый может интеркалировать (встраиваться) в двухцепочечную нуклеиновую кислоту, а может также и связываться с одно- и двухцепочечной нуклеиновой кислотой, взаимодействуя электростатически с ее фосфатными группами. Поглощаемый ультрафиолетовый свет с длиной волны 260 нм может испускаться в виде флуоресценции. При этом двухцепочечная нуклеиновая кислота флуоресцирует при 530 нм (зеленый свет), а одноцепочечная - при 640 нм (красный свет).

Гели окрашивают, выдерживая их в течение 1 ч в растворе 30 мкг/мл акридинового оранжевого в 10 мМ растворе соли. Отмывают в течение 1 ч в 0,1 мМ растворе соли.

предыдущая главасодержаниеследующая глава






Ученые добавили две новые буквы в генетический код

В наших генах есть два «неандертальских процента»

Сколько у вас хромосом? История одной мутации

Инвестиции в редактирование генома

Распространение артритов объяснили исходом человека из Африки

Обнаружены гены, отвечающие за чувствительность к магнитному полю Земли

Вредные мутации в геноме усиливают влияние друг друга

Найдены 6 500 генов, отличающие мужчин от женщин

Антропологи извлекли ДНК древних людей из пещер без костных останков

Расшифровка генома ячменя принесла больше вопросов, чем ответов

Сибирские генетики сделали первые шаги к управлению фотосинтезом

Александр Баев – один из пионеров исследований генома человека

215 петабайт в одном грамме ДНК




© Злыгостев Алексей Сергеевич, подборка материалов, оцифровка, статьи, оформление, разработка ПО 2013-2018
При копировании материалов проекта обязательно ставить активную ссылку на страницу источник:
http://genetiku.ru/ 'Genetiku.ru: Генетика'

Рейтинг@Mail.ru