Новости     Библиотека     Словарь-справочник     Ссылки     О сайте













предыдущая главасодержаниеследующая глава

II. Равновесное центрифугирование в градиенте плотности KI

  1. Отделите нужный фрагмент, проведя электрофорез в агарозном геле. Используйте трис-ацетатный или трис-фосфатный буфер (см. методику 20), содержащий 0,5 мкг/мл бромистого этидия.
  2. Осветите длинноволновым УФ-светом лишь небольшую полоску геля, чтобы УФ не повредил основной гель. Вырежьте кусочек геля, содержащий ДНК, и взвесьте его.
  3. Растворите гель в насыщенном растворе KI.
  4. Добавьте бромистый этидий до конечной концентрации около 50 мкг/мл.
  5. Доведите плотность до 1,5 г/мл. Показатель преломления η20=0,1731·ρ+1,1617 (выполняется для 1,3≤ρ≤1,7).
  6. Центрифугируйте до достижения равновесия при 30000 об/мин и 20°С в течение 24-48 ч.

Литература

Blin N., Gabain A. V., Bujard H., 1975. Isolation of large molecular weight DNA from agarose gels for further digestion by restriction enzymes, FEBS Lett., 53, 84.

предыдущая главасодержаниеследующая глава




© Злыгостев Алексей Сергеевич, подборка материалов, оцифровка, статьи, оформление, разработка ПО 2013-2017
При копировании материалов проекта обязательно ставить активную ссылку на страницу источник:
http://genetiku.ru/ "Genetiku.ru: Генетика"