НОВОСТИ    БИБЛИОТЕКА    СЛОВАРЬ-СПРАВОЧНИК    КАРТА САЙТА    ССЫЛКИ    О САЙТЕ

предыдущая главасодержаниеследующая глава

III. Электроэлюция ДНК в гидроксилапатит

  1. С помощью электрофореза в агарозном геле отделите нужный фрагмент. Используйте трис-ацетатный буфер (методика 20), содержащий 0,5 мкг/мл бромистого этидия. Слейте из аппарата столько буфера, чтобы поверхность геля оказалась выше его уровня.
  2. Осветите гель длинноволновым УФ-светом и разглядите полосы ДНК. Непосредственно перед нужной полосой вырежьте лунку шириной 1-2 мм.
  3. Заполните эту лунку плотной взвесью гидроксилапатита НТР Bio-Rad (в трис-ацетатном буфере для электрофореза). Заполните лунку доверху, добавляя взвесь по мере осаждения частиц.
  4. Осторожно залейте гель буфером и продолжайте электрофорез. Освещая гель длинноволновым УФ-светом, следите за движением полосы ДНК из геля в гидроксилапатит.
  5. После того как полоса полностью выйдет из геля, прекратите электрофорез. Пользуясь пастеровской пипеткой, перенесите гидроксилапатит в другую пастеровскую пипетку, которая заткнута силиконизированной стеклянной ватой и закреплена таким образом, что получилась маленькая колонка.
  6. Промойте эту колонку пятью объемами (обычно 5 раз по 200 мкл) буфера 10 мМ KPO4 (рН 6,8) с 0,5 мкг/мл бромистого этидия. Промойте еще пятью объемами буфера 100 мМ KPO4 с 0,5 мкг/мл бромистого этидия.
  7. Элюируйте ДНК буфером 400 мМ KPO4 с 0,5 мкг/мл бромистого этидия. Собирайте небольшие фракции (~50 мкл) и следите за флуоресценцией под длинноволновым УФ-светом.
  8. Объедините фракции, которые содержат ДНК. Проведите экстракцию фенолом, насыщенным буфером.
  9. Отберите водную фазу. Диализуйте ее в течение ночи против 10 мМ трис-HCl (рН 8) и 1 мМ Na3-ЭДТА.

Литература

Tabak H. F., Flavell R. A., 1978. A method for the recovery of DNA from agarose gels, Nucleic Acids Res., 5, 2321.

предыдущая главасодержаниеследующая глава






Генетики нашли в ДНК мужчин следы древней «войны кланов»

Европейцы и азиаты посветлели независимо друг от друга

Современные высшие растения возникли в результате сдвига экспрессии генов

Генетики нашли «семью», состоящую из 13 миллионов человек

Прочитали рекордный по длине геном мексиканской амбистомы - 32 миллиарда пар нуклеотидных оснований

ДНК человека, умершего в 1827 году, восстановили без его останков

Генетики изучили жителей Новой Гвинеи

Ученые добавили две новые буквы в генетический код

В наших генах есть два «неандертальских процента»

Сколько у вас хромосом? История одной мутации

Инвестиции в редактирование генома

Распространение артритов объяснили исходом человека из Африки

Обнаружены гены, отвечающие за чувствительность к магнитному полю Земли

Вредные мутации в геноме усиливают влияние друг друга

Найдены 6 500 генов, отличающие мужчин от женщин

Антропологи извлекли ДНК древних людей из пещер без костных останков

Расшифровка генома ячменя принесла больше вопросов, чем ответов

Сибирские генетики сделали первые шаги к управлению фотосинтезом

Александр Баев – один из пионеров исследований генома человека

215 петабайт в одном грамме ДНК




© Злыгостев Алексей Сергеевич, подборка материалов, оцифровка, статьи, оформление, разработка ПО 2013-2018
При копировании материалов проекта обязательно ставить активную ссылку на страницу источник:
http://genetiku.ru/ 'Genetiku.ru: Генетика'

Рейтинг@Mail.ru