НОВОСТИ    БИБЛИОТЕКА    СЛОВАРЬ-СПРАВОЧНИК    КАРТА САЙТА    ССЫЛКИ    О САЙТЕ

предыдущая главасодержаниеследующая глава

II. Формамидная методика

А. 1. Расправляющий раствор. Используйте 50 мкл раствора: 10 мкл 1 М трис-HCl (рН 8,5), 0,1 М Na3-ЭДТА и 0,5 мг/мл цитохрома c, 
      25 нг ДНК, 
      H2O до конечного объема 60 мкл,
      40 мкл формамида.
   2. Нижняя фаза (приготавливается не ранее чем за 5 мин до использования):
0,01 М трис и Ю-3 М Na2-ЭДТА (рН 8,5) (100 мл), 10%-ный формамид (10 мл).

Б. Окрашивание

1. В 10 мл 90%-ного этанола добавьте 10 мкл основного раствора уранилацетата (0,05 М уранилацетат и 0,05 М HCl в H2O).
2. Храните закрытым, в темноте.
3. Окрашивайте сеточки в течение 30 с.
4. Промывайте по 5 с в 90%-ном этаноле.

В. Изоденатурирующие условия (для ряда расправляющих растворов и нижних фаз)
Расправляющий раствор Нижняя фаза
1. 30%-ный раствор формамида 5%-ный раствор формамида
0,1 М трис (рН 8,5) 0,01 М трис (рН 8,5)
0,01 М Na2-ЭДТА 0,001 М Na2-ЭДТА
2. 40%-ный раствор формамида 10%-ный раствор формамида
0,1 М трис (рН 8,5) 0,01 М трис (рН 8,5)
0,01 М Na2-ЭДТА 0,001 М Na2-ЭДТА
3. 50%-ный раствор формамида 20%-ный раствор формамида
0,1 М трис (рН 8,5) 0,01 М трис (рН 8,5)
0,01 М Na2-ЭДТА 0,001 М Na2-ЭДТА
4. 60%-ный раствор формамида 30%-ный раствор формамида
0,1 М трис (рН 8,5) 0,01 М трис (рН 8,5)
0,01 М Na2-ЭДТА 0,001 М Na2-ЭДТА
5. 70%-иый раствор формамида 40%-ный раствор формамида
0,1 М трис (рН 8,5) 0,01 М трис (рН 8,5)
0,01 М Na2-ЭДТА 0,001 М Na2-ЭДТА
6. 80%-ный раствор формамида 50%-ный раствор формамида в дистиллированной воде
0,05 М трис (рН 8,5)
0,005 М Na2-ЭДТА

Литература

Davis R. W., Hyman R. W., 1971. A study in evolution: Homology between coliphages T7 and T3, J. Mol. Biol., 62, 287.

Davis R. W., Simon M. N., Davidson N., 1971. Electron microscope heteroduplex methods for mapping regions of base sequence homology in nucleic acids, Methods Enzymol, 21 D, 413.

предыдущая главасодержаниеследующая глава






Ученые добавили две новые буквы в генетический код

В наших генах есть два «неандертальских процента»

Сколько у вас хромосом? История одной мутации

Инвестиции в редактирование генома

Распространение артритов объяснили исходом человека из Африки

Обнаружены гены, отвечающие за чувствительность к магнитному полю Земли

Вредные мутации в геноме усиливают влияние друг друга

Найдены 6 500 генов, отличающие мужчин от женщин

Антропологи извлекли ДНК древних людей из пещер без костных останков

Расшифровка генома ячменя принесла больше вопросов, чем ответов

Сибирские генетики сделали первые шаги к управлению фотосинтезом

Александр Баев – один из пионеров исследований генома человека

215 петабайт в одном грамме ДНК




© Злыгостев Алексей Сергеевич, подборка материалов, оцифровка, статьи, оформление, разработка ПО 2013-2018
При копировании материалов проекта обязательно ставить активную ссылку на страницу источник:
http://genetiku.ru/ 'Genetiku.ru: Генетика'

Рейтинг@Mail.ru