НОВОСТИ    БИБЛИОТЕКА    СЛОВАРЬ-СПРАВОЧНИК    КАРТА САЙТА    ССЫЛКИ    О САЙТЕ

предыдущая главасодержаниеследующая глава

I. Среды


Ализариновый желтый G и GG производятся фирмой MCB, а анилиновый голубой - фирмой Fisher. Непосредственно перед использованием раствор ализаринового желтого следует прогреть, так как при комнатной температуре этот краситель нерастворим.


Автоклавируйте, а затем добавьте: 1-5 мг ампициллина в зависимости от партии. Ампициллина должно быть добавлено столько, чтобы только-только подавить чувствительные клетки, 25 мг хлористого 2,3,5-трифенилтетразолия, 33 мл стерильного 30%-ного раствора глюкозы.


З. Среда Е (минимальная среда Фогеля - Боннера)

Для приготовления 1 л среды E 50× растворяйте в воде при температуре не ниже 45°С указанные ниже соли (в том по рядке, в котором они приведены). Храните с хлороформом и стерилизуйте после того, как разведете.


Жидкая среда. Разведите в 50 раз, простерилизуйте и добавьте необходимые сахара и пищевые добавки. Для чашек. Приготовьте равные объемы среды E 2× и 3%-ного агара Bacto, автоклавируйте их по отдельности и добавьте необходимые сахара и пищевые добавки.

И. Среда NCE (среда E без углерода или без цитрата)

Этой средой пользуются в тех случаях, когда в селективной среде должен использоваться какой-нибудь источник углерода, отличный от глюкозы или цитрата. Клетки Salmonella могут использовать цитрат, добавленный в среду E в качестве хелатирующего соединения. Поэтому для Salmonella нужно применять минимальную среду без цитрата. Если исключить из концентрата среды NCE MgSO4 и добавлять его в среду уже после ее разведения, то можно приготовить среду NCE, концентрированную в 50 раз.

NCE 50 ×(1 л) KH2PO4 197 г
K2HPO4·H2O 325,1 г
Na(NH4)HPO4·H2O 175 г
H2O 925 мл
Раствор MgSO4 1000 × (1 М MgSO4 для среды NCE) MgSO4 265,5 г
H2O 1000 мл

Чтобы приготовить среду NCE 2×, смешайте

1 л H2O,
40 мл концентрированной среды NCE 50×,
2 мл раствора MgSO4 1000×.

Автоклавируйте эту смесь, добавьте равный объем расплавленного агара 2× (3%-ного), добавьте источник углерода (обычно до конечной концентрации 1%) и разливайте чашки.

К. Среда М9

На 1 л Na2HPO4·H2O 6 г
KH2PO4 3 г
NaCl 0,5 г
NH4Cl 1 г

Автоклавируйте, затем добавьте стерильные растворы:

1 М MgSO4 1 мл
0,01 М CaCl2 10 мл

(Если используете обычный неочищенный агар, то CaCl2 можно не добавлять.)

Для чашек. Приготовьте равные объемы среды М9 2× и 3%-ного агара Bacto. Автоклавируйте по отдельности, смешайте и добавьте сахар (например, 0,2%-ный раствор глюкозы или мальтозы) и необходимые пищевые добавки. Для приготовления верхнего агара М9 смешайте равные объемы автоклавированных по отдельности среды М9 2× и 1,3%-кого агара Bacto. Иногда при длительном хранении верхнего агара М9 (или при повторном его плавлении) образуется тонкий преципитат. Такой преципитат безвреден.

Л. Чашки Мак-Конки

На 1 л Основной агар Мак-Конки (Difco) 40 г.

Автоклавируйте, затем добавьте сахар до 1%. Фирма Difco производит также среду, уже содержащую лактозу.


Растворы А и Б автоклавируйте по отдельности при давлении 1,05 атм в течение 20 мин (важно выдержать время). Смешайте и охладите до такой температуры, при которой можно разливать чашки. Добавьте 5 мл ZnCl2 (20 мМ). Добавьте также либо 6 мл фузаровой кислоты (с концентрацией 2 мг/мл), либо 10 мл хинальдиновой кислоты (с концентрацией 10 мг/мл).


Автоклавируйте (или нагрейте в микроволновой печи), тщательно перемешайте. Разлейте по флаконам и затем автоклавируйте, чтобы простерилизовать. Не нужно разливать стерильную среду по стерильным флаконам, не проводя после этого повторной стерилизации.

П. Среда λYM

Эта среда состоит из бульона для фага λ, 0,01%-ного дрожжевого экстракта и 0,2%-ного раствора мальтозы. Она часто упоминается в литературе, но обычно ее можно заменить средой TYM.

Р. Бульон TYM

Это бульон LB, содержащий 0,2% мальтозы. Для этого в бульон добавляют 1/100 объема стерильного 20%-ного раствора мальтозы.

С. Среда для разведения фага λ

10 мМ трис-HCl (рН 7,5) и 10 мМ MgSO4. Иногда для длительного хранения препаратов фага λ рекомендуется добавить NaCl до 50 мМ и желатину до 0,01%. Это особенно полезно, если фаг был очищен в растворе CsCl.

Т. Забуференный физиологический раствор

0,85% (в/об) NaCl и 0,066 М NaPO4 (рН 7,0).

предыдущая главасодержаниеследующая глава






Генетики нашли в ДНК мужчин следы древней «войны кланов»

Европейцы и азиаты посветлели независимо друг от друга

Современные высшие растения возникли в результате сдвига экспрессии генов

Генетики нашли «семью», состоящую из 13 миллионов человек

Прочитали рекордный по длине геном мексиканской амбистомы - 32 миллиарда пар нуклеотидных оснований

ДНК человека, умершего в 1827 году, восстановили без его останков

Генетики изучили жителей Новой Гвинеи

Ученые добавили две новые буквы в генетический код

В наших генах есть два «неандертальских процента»

Сколько у вас хромосом? История одной мутации

Инвестиции в редактирование генома

Распространение артритов объяснили исходом человека из Африки

Обнаружены гены, отвечающие за чувствительность к магнитному полю Земли

Вредные мутации в геноме усиливают влияние друг друга

Найдены 6 500 генов, отличающие мужчин от женщин

Антропологи извлекли ДНК древних людей из пещер без костных останков

Расшифровка генома ячменя принесла больше вопросов, чем ответов

Сибирские генетики сделали первые шаги к управлению фотосинтезом

Александр Баев – один из пионеров исследований генома человека

215 петабайт в одном грамме ДНК




© Злыгостев Алексей Сергеевич, подборка материалов, оцифровка, статьи, оформление, разработка ПО 2013-2018
При копировании материалов проекта обязательно ставить активную ссылку на страницу источник:
http://genetiku.ru/ 'Genetiku.ru: Генетика'

Рейтинг@Mail.ru