I. Среды

Ализариновый желтый G и GG производятся фирмой MCB, а анилиновый голубой - фирмой Fisher. Непосредственно перед использованием раствор ализаринового желтого следует прогреть, так как при комнатной температуре этот краситель нерастворим.

Автоклавируйте, а затем добавьте: 1-5 мг ампициллина в зависимости от партии. Ампициллина должно быть добавлено столько, чтобы только-только подавить чувствительные клетки, 25 мг хлористого 2,3,5-трифенилтетразолия, 33 мл стерильного 30%-ного раствора глюкозы.

З. Среда Е (минимальная среда Фогеля - Боннера)

Для приготовления 1 л среды E 50× растворяйте в воде при температуре не ниже 45°С указанные ниже соли (в том по рядке, в котором они приведены). Храните с хлороформом и стерилизуйте после того, как разведете.

Жидкая среда. Разведите в 50 раз, простерилизуйте и добавьте необходимые сахара и пищевые добавки. Для чашек. Приготовьте равные объемы среды E 2× и 3%-ного агара Bacto, автоклавируйте их по отдельности и добавьте необходимые сахара и пищевые добавки.

И. Среда NCE (среда E без углерода или без цитрата)

Этой средой пользуются в тех случаях, когда в селективной среде должен использоваться какой-нибудь источник углерода, отличный от глюкозы или цитрата. Клетки Salmonella могут использовать цитрат, добавленный в среду E в качестве хелатирующего соединения. Поэтому для Salmonella нужно применять минимальную среду без цитрата. Если исключить из концентрата среды NCE MgSO₄ и добавлять его в среду уже после ее разведения, то можно приготовить среду NCE, концентрированную в 50 раз.

Чтобы приготовить среду NCE 2×, смешайте

1 л H2O,
40 мл концентрированной среды NCE 50×,
2 мл раствора MgSO4 1000×.

Автоклавируйте эту смесь, добавьте равный объем расплавленного агара 2× (3%-ного), добавьте источник углерода (обычно до конечной концентрации 1%) и разливайте чашки.

К. Среда М9

Автоклавируйте, затем добавьте стерильные растворы:

(Если используете обычный неочищенный агар, то CaCl₂ можно не добавлять.)

Для чашек. Приготовьте равные объемы среды М9 2× и 3%-ного агара Bacto. Автоклавируйте по отдельности, смешайте и добавьте сахар (например, 0,2%-ный раствор глюкозы или мальтозы) и необходимые пищевые добавки. Для приготовления верхнего агара М9 смешайте равные объемы автоклавированных по отдельности среды М9 2× и 1,3%-кого агара Bacto. Иногда при длительном хранении верхнего агара М9 (или при повторном его плавлении) образуется тонкий преципитат. Такой преципитат безвреден.

Л. Чашки Мак-Конки

На 1 л Основной агар Мак-Конки (Difco) 40 г.

Автоклавируйте, затем добавьте сахар до 1%. Фирма Difco производит также среду, уже содержащую лактозу.

Растворы А и Б автоклавируйте по отдельности при давлении 1,05 атм в течение 20 мин (важно выдержать время). Смешайте и охладите до такой температуры, при которой можно разливать чашки. Добавьте 5 мл ZnCl₂ (20 мМ). Добавьте также либо 6 мл фузаровой кислоты (с концентрацией 2 мг/мл), либо 10 мл хинальдиновой кислоты (с концентрацией 10 мг/мл).

Автоклавируйте (или нагрейте в микроволновой печи), тщательно перемешайте. Разлейте по флаконам и затем автоклавируйте, чтобы простерилизовать. Не нужно разливать стерильную среду по стерильным флаконам, не проводя после этого повторной стерилизации.

П. Среда λYM

Эта среда состоит из бульона для фага λ, 0,01%-ного дрожжевого экстракта и 0,2%-ного раствора мальтозы. Она часто упоминается в литературе, но обычно ее можно заменить средой TYM.

Р. Бульон TYM

Это бульон LB, содержащий 0,2% мальтозы. Для этого в бульон добавляют 1/100 объема стерильного 20%-ного раствора мальтозы.

С. Среда для разведения фага λ

10 мМ трис-HCl (рН 7,5) и 10 мМ MgSO₄. Иногда для длительного хранения препаратов фага λ рекомендуется добавить NaCl до 50 мМ и желатину до 0,01%. Это особенно полезно, если фаг был очищен в растворе CsCl.

Т. Забуференный физиологический раствор

0,85% (в/об) NaCl и 0,066 М NaPO₄ (рН 7,0).