3.1.2. Анализ градиента переноса маркеров

Метод основан на вероятности спонтанного разрыва хромосомы донора во время ее переноса в реципиентную клетку. Отсюда возникает большая вероятность переноса и наследования более проксимального маркера, чем дистального. Смесь скрещиваемых бактерий перед разведением и высевом на селективные среды выдерживается длительное время, например 90-100 мин. Количество генетических маркеров в колониях рекомбинантов находится в прям ой зависимости от точки начала переноса хромосомы. Таким способом можно определить положение на хромосомной карте неизвестного маркера, если в опыте одновременно исследуется градиент переноса ряда маркеров с известной локализацией.

В качестве примера приводим результаты распределения неселективных маркеров донора в скрещивании штаммов HfrH X F^- (табл. 3.1). Анализ градиента переноса маркеров дает предварительную информацию о расположении гена на карте, которая затем используется для выбора соответствующего донора Hfr с целью более точного картирования маркера с помощью анализа времени переноса или рекомбинационного анализа.

Таблица 3.1. Градиент переноса маркеров в скрещивании Hfr X F^- [12]

(Примечание. Штаммы родителей в кроссах 1 и 2 профага λ, не содержат, в скрещивании 3 - лизогенный реципиент, а в 4 - донор. В результате лизогенной индукции выход рекомбинантов по генам gal и bio в кроссе 4 резко снижен. В кроссе 2 наблюдаются два максимума, которые образуются вокруг проксимального и селективного маркеров. Прочерк - маркеры не проверялись)