НОВОСТИ    БИБЛИОТЕКА    СЛОВАРЬ-СПРАВОЧНИК    КАРТА САЙТА    ССЫЛКИ    О САЙТЕ

предыдущая главасодержаниеследующая глава

Методика

Транспозиция Tn10

1. Смешайте фаг P22 (лизат клетки NK337) и клетки Salmonella дикого типа (штамм LT2) в таком соотношении, чтобы множественность заражения была меньше единицы. Инкубируйте, чтобы провести адсорбцию фага. Вылейте смесь на чашки со средой LB + тетрациклин (20 мкг/мл) + ЭГТА (10 мМ). Высевайте столько клеток, чтобы получить около 100-200 колоний в расчете на одну чашку (см. методику 5). Приготовьте 15 таких чашек на одну группу. Инкубируйте чашки при 40°С до тех пор, пока не появятся колонии (около 24-36 ч).

Выявление ауксотрофов

2. Каждую трансдукционную чашку перепечатайте на чашку LB + тетрациклин (20 мкг/мл) + ЭГТА и на чашку E + тетрациклин (10 мкг/мл). Инкубируйте при 37°С.

3. Сравните чашки-реплики с богатой средой и с минимальной средой. Выявив колонию, выросшую на богатой среде, но отсутствующую на чашке с минимальной средой, отберите ее уколом с чашки с богатой средой и рассейте штрихом до отдельных колоний на чашке Green+ тетрациклин (без ЭГТА). Такие чашки с рассевом инкубируйте при 37°С.

Классификация ауксотрофов

4. Со штриха каждого потенциального ауксотрофа отберите уколом слабоокрашенную (чувствительную к фагу) колонию. По шаблону перенесите все такие колонии на отдельные ячейки на чашке Green + тетрациклин + ЭГТА. Инкубируйте чашки при 37°С.

5. Перепечатайте засеянную по шаблону чашку (чашки) с потенциальными ауксотрофами на 11 чашек с диагностическими средами (см. приложение 2), на чашку с минимальной средой и на чашку со средой Green + тетрациклин + ЭГТА. Все чашки инкубируйте при 37°С в течение 24-36 ч. Исходные чашки сохраните.

6. Просмотрите чашки-реплики. Определите вероятные потребности каждого ауксотрофа. Проведите повторную очистку

ауксотрофов, рассеяв клетки с чашки-реплики с богатой средой (Green + тетрациклин + ЭГТА) до отдельных колоний. Затем из полученных отдельных колоний каждого ауксотрофа засейте пробирки по 2 мл жидкой культуры. Инкубируйте со встряхиванием при 37°С.

Проверка чувствительности к фагу и пищевых потребностей мутантов

7. Чтобы проверить, чувствительность к фагу, нанесите штрихи культур каждого из потенциальных ауксотрофов на чашку Green + тетрациклин (без ЭГТА) и поперек этих штрихов нанесите штрих фага P22. На отдельных чашках с минимальной средой разотрите 0,1 мл каждой культуры. На эти чашки добавьте по несколько кристалликов того необходимого питательного вещества, которое было выявлено с помощью диагностических сред.

8. Просмотрите результаты тестов на чувствительность к фагу и тестов с кристалликами питательных веществ. Все те ауксотрофы, которые чувствительны к фагу и которые отвечают на идентифицированное питательное вещество, можно закладывать на хранение. Приготовьте столбик с культурой для длительного хранения и занесите штамм в журнал.

предыдущая главасодержаниеследующая глава






Генетики нашли в ДНК мужчин следы древней «войны кланов»

Европейцы и азиаты посветлели независимо друг от друга

Современные высшие растения возникли в результате сдвига экспрессии генов

Генетики нашли «семью», состоящую из 13 миллионов человек

Прочитали рекордный по длине геном мексиканской амбистомы - 32 миллиарда пар нуклеотидных оснований

ДНК человека, умершего в 1827 году, восстановили без его останков

Генетики изучили жителей Новой Гвинеи

Ученые добавили две новые буквы в генетический код

В наших генах есть два «неандертальских процента»

Сколько у вас хромосом? История одной мутации

Инвестиции в редактирование генома

Распространение артритов объяснили исходом человека из Африки

Обнаружены гены, отвечающие за чувствительность к магнитному полю Земли

Вредные мутации в геноме усиливают влияние друг друга

Найдены 6 500 генов, отличающие мужчин от женщин

Антропологи извлекли ДНК древних людей из пещер без костных останков

Расшифровка генома ячменя принесла больше вопросов, чем ответов

Сибирские генетики сделали первые шаги к управлению фотосинтезом

Александр Баев – один из пионеров исследований генома человека

215 петабайт в одном грамме ДНК




© Злыгостев Алексей Сергеевич, подборка материалов, оцифровка, статьи, оформление, разработка ПО 2013-2018
При копировании материалов проекта обязательно ставить активную ссылку на страницу источник:
http://genetiku.ru/ 'Genetiku.ru: Генетика'

Рейтинг@Mail.ru