Обоснование и план эксперимента

В этом эксперименте фаг P22 (HT, int^-) выращивают на штамме, несущем вставку Tn10 вблизи жизненно важного гена hisW на 47-й минуте карты Salmonella (Anton, 1968; Brenchley, Ingraham, 1973). По этому гену получены чувствительные к холоду условно-летальные мутации. Такие мутанты при пермиссивной температуре оказываются конститутивными по his-оперону. Задача заключается в том, чтобы посредством локального мутагенеза этой области получить условно-летальную мутацию, чувствительную к повышению температуры. Препарат фага следует обработать гидроксиламином, как это описано в методике 8. Этот мутагенизированный препарат фага используется затем для трансдукции элемента Tn10 (т. е. устойчивости к тетрациклину) в реципиент дикого типа (LT2). После этого следует проверка трансдуктантов на наличие температурочувствительной условно-летальной мутации или нелетальной конститутивной мутации hisW. Таких трансдуктантов можно идентифицировать по тому, что они образуют морщинистые колонии на чашках с 2%-ным раствором глюкозы (Murray, Hartman, 1972).