Методика

Мутагенез области hisW

1. Отдельной колонией штамма LT2 засейте небольшой объем среды (3 мл). Культуру инкубируйте при 37°С со встряхиванием.

2. По чашке Е + тетрациклин + 2% глюкозы разотрите 0,1 мл клеток LT2 и 0,1 мл препарата фага, выращенного на штамме TT5371 (hisW⁺zeh-754 :: Tn10) и сильно мутагенизированного гидроксиламином (см. методику 8). Приготовьте 10 таких чашек и инкубируйте их при 30°С до тех пор, пока не станут видны крохотные (как острие булавки) колонии (т. е. в течение 12-18 ч). После этого перенесите чашки на 40°С и продолжайте инкубацию, пока большинство колоний не станут большими.

Идентификация мутантов

3. Поищите на чашках крохотные колонии (потенциальные температурочувствительные мутанты) и мо