НОВОСТИ    БИБЛИОТЕКА    СЛОВАРЬ-СПРАВОЧНИК    КАРТА САЙТА    ССЫЛКИ    О САЙТЕ

предыдущая главасодержаниеследующая глава

Методика 11. Выделение ДНК из фага λ

I. Формамидный метод

    А.
  1. Смешайте 1 объем фага в растворе CsCl с плотностью, равной плавучей плотности фага, 10 мМ MgSO4, 10 мМ. трис (рН 8), и 0,1 мМ Na2-ЭДТА с 1/10 объема 2 М трис и 0,2 М Na2-ЭДТА (рН 8,5) в полипропиленовой пробирке от микрофуги.
  2. Добавьте 1 объем формамида и оставьте при комнатной температуре на время от 30 мин до нескольких часов.
  3. Добавьте 1 объем H2O.
  4. Добавьте 6 объемов этанола при комнатной температуре.
  5. Осадите ДНК, проведя центрифугирование в микрофуге в течение 2 с.
  6. Слейте надосадочную жидкость. Сполосните осадок 70%-ным этанолом.
  7. Слейте раствор, которым промывали осадок. Сухой осадок растворите в 10 мМ трис (рН 7,5) и 1 мМ Na2-ЭДТА.
  8. Для длительного хранения повысьте концентрацию соли.
    Б.
  1. Смешайте фаг в растворе CsCl с плотностью, равной плавучей плотности фага, 10 мМ MgSO4, 10 мМ трис (рН 8), и 0,1 мМ Na2-ЭДТА с 1/10 объема 0,2 М Na2-ЭДТА.
  2. Диализуйте против 50% раствора формамида, 0,2 М трис (рН 8,5) и 0,02 М Na2-ЭДТА при комнатной температуре в течение 12-24 ч.
  3. Диализуйте против буфера для хранения ДНК (0,1 М NaCl, 0,05 М трис (рН 8,5) и 0,01 М Na2-ЭДТА). Если будете расщеплять препарат ДНК эндонуклеазой EcoRI, то диализуйте против 0,1 М NaCl, 0,05 М трис (рН 7,4) и 0,1 мМ Na2-ЭДТА.
  4. Необходимо четыре раза сменять буфер в объеме, в 200 раз превышающем объем диализуемого раствора.

Литература

Thomas M., Davis R. W., 1974. Studies on the cleavage of bacteriophage lambda DNA with ?coRI restriction endonuclease, J. Mol. Biol, 91, 315.

St. John T. (личное сообщение).

предыдущая главасодержаниеследующая глава






Генетики нашли в ДНК мужчин следы древней «войны кланов»

Европейцы и азиаты посветлели независимо друг от друга

Современные высшие растения возникли в результате сдвига экспрессии генов

Генетики нашли «семью», состоящую из 13 миллионов человек

Прочитали рекордный по длине геном мексиканской амбистомы - 32 миллиарда пар нуклеотидных оснований

ДНК человека, умершего в 1827 году, восстановили без его останков

Генетики изучили жителей Новой Гвинеи

Ученые добавили две новые буквы в генетический код

В наших генах есть два «неандертальских процента»

Сколько у вас хромосом? История одной мутации

Инвестиции в редактирование генома

Распространение артритов объяснили исходом человека из Африки

Обнаружены гены, отвечающие за чувствительность к магнитному полю Земли

Вредные мутации в геноме усиливают влияние друг друга

Найдены 6 500 генов, отличающие мужчин от женщин

Антропологи извлекли ДНК древних людей из пещер без костных останков

Расшифровка генома ячменя принесла больше вопросов, чем ответов

Сибирские генетики сделали первые шаги к управлению фотосинтезом

Александр Баев – один из пионеров исследований генома человека

215 петабайт в одном грамме ДНК




© Злыгостев Алексей Сергеевич, подборка материалов, оцифровка, статьи, оформление, разработка ПО 2013-2018
При копировании материалов проекта обязательно ставить активную ссылку на страницу источник:
http://genetiku.ru/ 'Genetiku.ru: Генетика'

Рейтинг@Mail.ru