Новости     Библиотека     Словарь-справочник     Ссылки     О сайте













предыдущая главасодержаниеследующая глава

II. Быстрый метод выделения ДНК фага λ

  1. Получите обычный препарат фага λ на чашках, используя среды с агарозой.
  2. Охладите чашки. Налейте на них по 5 мл холодного буфера для разведения фага λ. Оставьте чашки на ночь при 4°С.
  3. Пипеткой перенесите 0,4 мл осветленного лизата в пробирку на 1,5 мл от микрофуги. Оставшийся лизат можно сохранить для целей культивирования.
  4. Добавьте 1 мкл диэтилоксидиформата при комнатной температуре.
  5. Добавьте 10 мкл 10%-ного раствора ДСН (додецилсульфата натрия). Перевернув пробирку, перемешайте содержимое.
  6. Добавьте 50 мкл раствора 2 М трис и 0,2 М Na2-ЭДТА (рН 8,5). Перемешайте.
  7. Инкубируйте в течение 5 мин при 70°С, прикрыв сверху крышкой.
  8. Добавьте 50 мкл 5 М ацетата калия.
  9. Охладите пробирки и поместите их в лед, по крайней мере на 30 мин.
  10. Осадите преципитат центрифугированием в микрофуге в течение 15 мин.
  11. Надосадочную жидкость слейте в новую пробирку.
  12. Заполните пробирку этанолом при комнатной температуре.
  13. Отцентрифугируйте в микрофуге в течение 5 мин.
  14. Слейте надосадочную жидкость. Переверните пробирку и поставьте ее на бумажное полотенце, чтобы позволить жидкости стечь. Вся жидкость должна либо стечь, либо ее нужно испарить, однако нельзя пересушить осадок.
  15. Растворите осадок ДНК в 50 мкл раствора: 10 мМ трис (рН 7,5), 1 мМ Na3-ЭДТА, 10 мкг/мл РНКазы А.
  16. Обычно достаточно 5 мкл на одну пробу по рестрикции и на одну дорожку в геле.
предыдущая главасодержаниеследующая глава




© Злыгостев Алексей Сергеевич, подборка материалов, оцифровка, статьи, оформление, разработка ПО 2013-2017
При копировании материалов проекта обязательно ставить активную ссылку на страницу источник:
http://genetiku.ru/ "Genetiku.ru: Генетика"