Новости     Библиотека     Словарь-справочник     Ссылки     О сайте













предыдущая главасодержаниеследующая глава

Методика 15. Упаковка ДНК фага λ в вирусные частицы in vitro

I. Упаковка

  1. Возьмите 20 мкл индуцированных упаковывающих клеток хранящихся при -70°С.
  2. Перенесите в лед для оттаивания (не нагрейте!).
  3. После оттаивания добавьте 2 мкл 50 мМ АТР.
  4. Добавьте ≤1 мкг ДНК в объеме 1-10 мкл.
  5. Осторожно перемешайте (клетки не должны лизировать).
  6. Соберите жидкость на дно пробирки, проведя центрифугирование в микрофуге в течение 3 с.
  7. Инкубируйте при 37°С в течение 30-60 мин.
  8. Добавьте 0,2 мкл раствора ДНКазы I с концентрацией 1 мг/мл.
  9. Если нужна максимальная эффективность упаковки, то добавьте еще 20 мкл оттаявшего экстракта и 2 мкл 50 мМ АТР (это увеличивает количество фага примерно в два раза). Инкубируйте при 37°С еще в течение 30-60 мин.
  10. Добавьте 200 мкл буфера для разведения фага λ и храните так же, как препарат фага.
  11. Высевайте не более 10-15 мкл такого препарата на чашку диаметром 9 см, используя для газона нерестриктирующий штамм RD104 (C600 hsdR- hsdM+), не содержащий supF. Высев больших количеств препарата приведет к гибели бактериального газона.
предыдущая главасодержаниеследующая глава




© Злыгостев Алексей Сергеевич, подборка материалов, оцифровка, статьи, оформление, разработка ПО 2013-2017
При копировании материалов проекта обязательно ставить активную ссылку на страницу источник:
http://genetiku.ru/ "Genetiku.ru: Генетика"