Методика 18. Трансформация плазмидной ДНК

1. Разведите выращенную в бульоне LB ночную культуру штамма НВ101, RD102=HB101/λ или BNN45 в 100 раз в свежем бульоне LB (40 мл в колбе на 250 мл) при 37°С. Этого количества культуры достаточно для проведения 20 трансформаций.
2. Когда плотность культуры достигнет A₆₀₀=0,6 (через 2-3 ч), осадите клетки центрифугированием в течение 5 мин при 5000 об/мин и 2°С.
3. Ресуспендируйте в 20 мл 50 мМ CaCl₂ при 0°С и инкубируйте при 0°С в течение 5-60 мин.
4. Осадите клетки центрифугированием в течение 2 мин при 5000 об/мин и 2°С. Ресуспендируйте в 2 мл 50 мМ CaCl₂ при 0°С и инкубируйте при 0°С в течение 5-60 мин.
5. Добавьте 0,1 мл клеток к ДНК в 0,1 М трис при рН 7,2 (0,09 М трис-HCl, 0,01 М трис-основание) и 0°С. Инкубируйте при 0°С