Новости     Библиотека     Словарь-справочник     Ссылки     О сайте













предыдущая главасодержаниеследующая глава

Методика 19. Способность гибридного фага к комплементации в клетках E. coli

I. Литический отбор из пула гибридов E. coli

  1. Вырастите ауксотрофы до поздней экспоненциальной фазы в среде М9 + 0,2% мальтозы + необходимые пищевые добавки (40 мкг/мл каждой из необходимых аминокислот). Определите концентрацию клеток.
  2. Осадите клетки центрифугированием (8000 об/мин, 5 мин). Ресуспендируйте в 1/10 объема 10 мМ MgSO4 или в таком объеме, чтобы получилось 1010 клетка/мл.
  3. Адсорбируйте 2·106 частиц фага (или менее) на 2·109 клеток в течение 15 мин при 37°С. Эффективность высева комплементирующего фага равна примерно 1.
  4. Смешайте с 2,5 мл мягкого (~0,6%-ного) агара М9 и высейте на чашку. При 37°С для образования бляшек комплементирующего фага может потребоваться 6-40 ч.
  5. Проведите очистку бляшек на неселективной чашке (чашке LB) и повторно проверьте комплементацию.
предыдущая главасодержаниеследующая глава




© Злыгостев Алексей Сергеевич, подборка материалов, оцифровка, статьи, оформление, разработка ПО 2013-2017
При копировании материалов проекта обязательно ставить активную ссылку на страницу источник:
http://genetiku.ru/ "Genetiku.ru: Генетика"