Методика 19. Способность гибридного фага к комплементации в клетках E. coli

I. Литический отбор из пула гибридов E. coli

1. Вырастите ауксотрофы до поздней экспоненциальной фазы в среде М9 + 0,2% мальтозы + необходимые пищевые добавки (40 мкг/мл каждой из необходимых аминокислот). Определите концентрацию клеток.
2. Осадите клетки центрифугированием (8000 об/мин, 5 мин). Ресуспендируйте в ¹/₁₀ объема 10 мМ MgSO₄ или в таком объеме, чтобы получилось 10¹⁰ клетка/мл.
3. Адсорбируйте 2·10⁶ частиц фага (или менее) на 2·10⁹ клеток в течение 15 мин при 37°С. Эффективность высева комплементирующего фага равна примерно 1.
4. Смешайте с 2,5 мл мягкого (~0,6%-ного) агара М9 и высейте на чашку. При 37°С для образования бляшек комплементирующего фага может потребоваться 6-40 ч.
5. Проведите очистку бляшек на неселективной чашке (чашке LB) и повторно проверьте комплементацию.