НОВОСТИ    БИБЛИОТЕКА    СЛОВАРЬ-СПРАВОЧНИК    КАРТА САЙТА    ССЫЛКИ    О САЙТЕ

предыдущая главасодержаниеследующая глава

Методика

Быстрое выделение ДНК

1. Прямо из колоний штаммов, полученных в эксперименте 5, выделите ДНК. Можно выделять ДНК также и из небольших жидких культур объемом 1 мл. При выделении ДНК из колоний следуйте методике 12-II. Ресуспендируйте ДНК в 50 мкл раствора, содержащего 10 мМ трис (рН 7,5), 10-4 М Na2-ЭДТА, 10 мкг/мл РНКазы.

Расщепление рестрикционной эндонуклеазой

2. Расщепите 10 мкл полученной выше ДНК рестриктазой EcoRI, 10 мкл рестриктазой HindIII и 10 мкл совместно рестриктазами EcoRI и BamHl или EcoRI и HindIII, или HinIII и BamHI.

Электрофорез в геле

3. Каждую пробу расщепленной ДНК нанесите целиком в одну ячейку геля 0,7%-ной агарозы. Пользуйтесь трис-ацетатным буфером. Проводите электрофорез в течение ночи (при 20 В в течение 18 ч или при 30 В в течение 12 ч).

Используя методику 21-I, перенесите ДНК из геля на нитроцеллюлозу. Перенос проводите в течение ночи.

Гибридизация с набором рестрикционных фрагментов

4. Снимите полоску нитроцеллюлозы с геля, промойте и проведите отжиг. Поместите его в герметизируемый мешочек и добавьте зонд, как описано в методике 23.

После гибридизации в течение по крайней мере 24 ч выньте полоску нитроцеллюлозы, на которую был перенесен материал из геля, из мешочка, в котором проводилась гибридизация. Промойте ее, промокните досуха, оберните в пластиковую пленку и экспонируйте с рентгеновской пленкой.

Проявите пленку. Напишите на ней полное время экспозиции. Если экспозиция оказалась недостаточной, то заложите новую пленку.

предыдущая главасодержаниеследующая глава






Ученые добавили две новые буквы в генетический код

В наших генах есть два «неандертальских процента»

Сколько у вас хромосом? История одной мутации

Инвестиции в редактирование генома

Распространение артритов объяснили исходом человека из Африки

Обнаружены гены, отвечающие за чувствительность к магнитному полю Земли

Вредные мутации в геноме усиливают влияние друг друга

Найдены 6 500 генов, отличающие мужчин от женщин

Антропологи извлекли ДНК древних людей из пещер без костных останков

Расшифровка генома ячменя принесла больше вопросов, чем ответов

Сибирские генетики сделали первые шаги к управлению фотосинтезом

Александр Баев – один из пионеров исследований генома человека

215 петабайт в одном грамме ДНК




© Злыгостев Алексей Сергеевич, подборка материалов, оцифровка, статьи, оформление, разработка ПО 2013-2018
При копировании материалов проекта обязательно ставить активную ссылку на страницу источник:
http://genetiku.ru/ 'Genetiku.ru: Генетика'

Рейтинг@Mail.ru