НОВОСТИ    БИБЛИОТЕКА    СЛОВАРЬ-СПРАВОЧНИК    КАРТА САЙТА    ССЫЛКИ    О САЙТЕ

предыдущая главасодержаниеследующая глава

II. Локализованный мутагенез (по котрансдукции)

  1. Смешайте 1 мл буфера фосфат-ЭДТА, 1,5 мл стерильной воды, 2 мл гидроксиламина и 0,5 мл фага P22 (2·1011-2·1012 БОЕ/мл), выращенного на донорном штамме с каким-нибудь маркером, по которому можно проводить отбор и который сцеплен с той областью, в которой намереваетесь специфически получать мутации (Hong and Ames, 1971).
  2. Инкубируйте при 37°С в течение 20-50 ч.
  3. Периодически (через каждые 6-8 ч) отбирайте пробы, разводя их в холодной среде LBSE.
  4. Сразу же титруйте эти пробы, чтобы определить выживаемость и частоту мутаций, приводящих к прозрачным бляшкам (см. обсуждение).
  5. Примерно через 30-50 ч (или когда выживаемость составит около 0,1-1%) отцентрифугируйте смесь в роторе Sorvall в течение 2 ч при 1700 об/мин, чтобы осадить фаг. Ресуспендируйте осадок в 1 мл среды LBSE, просто залив его на ночь (периодически встряхивая). (Не разбивайте осадок с помощью пипетки.)
  6. Для трансдукции высейте около 0,1 мл мутагенизированного фага и 108 бактерий на чашку. Чашки должны быть со средой, которая является селективной для используемого селектируемого сцепленного маркера (например, TetR). Когда появятся колонии, их нужно перепечатать на чашки-реплики, чтобы выявить мутантов, несущих мутации, сцепленные с селектируемым маркером (например, Tn10).

Литература

Hong J.S., Ames B. N., 1971. Localized mutagenesis of any specific small region of the bacterial chromosome, Proc. Natl Acad. Sci., 68, 3158.

предыдущая главасодержаниеследующая глава






Генетики нашли в ДНК мужчин следы древней «войны кланов»

Европейцы и азиаты посветлели независимо друг от друга

Современные высшие растения возникли в результате сдвига экспрессии генов

Генетики нашли «семью», состоящую из 13 миллионов человек

Прочитали рекордный по длине геном мексиканской амбистомы - 32 миллиарда пар нуклеотидных оснований

ДНК человека, умершего в 1827 году, восстановили без его останков

Генетики изучили жителей Новой Гвинеи

Ученые добавили две новые буквы в генетический код

В наших генах есть два «неандертальских процента»

Сколько у вас хромосом? История одной мутации

Инвестиции в редактирование генома

Распространение артритов объяснили исходом человека из Африки

Обнаружены гены, отвечающие за чувствительность к магнитному полю Земли

Вредные мутации в геноме усиливают влияние друг друга

Найдены 6 500 генов, отличающие мужчин от женщин

Антропологи извлекли ДНК древних людей из пещер без костных останков

Расшифровка генома ячменя принесла больше вопросов, чем ответов

Сибирские генетики сделали первые шаги к управлению фотосинтезом

Александр Баев – один из пионеров исследований генома человека

215 петабайт в одном грамме ДНК




© Злыгостев Алексей Сергеевич, подборка материалов, оцифровка, статьи, оформление, разработка ПО 2013-2018
При копировании материалов проекта обязательно ставить активную ссылку на страницу источник:
http://genetiku.ru/ 'Genetiku.ru: Генетика'

Рейтинг@Mail.ru